低表达C3aR人肾足细胞的构建及鉴定

发布时间：2017-08-19 10:27

  本文关键词：低表达C3aR人肾足细胞的构建及鉴定

  更多相关文章： 低表达 CaR 转染 人肾足细胞

【摘要】：目的前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体(C3aR)在糖尿病肾病病中表达增加,但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚,文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系(HPC-C3aRsiRNA),为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提供细胞模型。方法设计合成人C3aR小干扰RNA(C3aRsiRNA),将其克隆到慢病毒表达载体中,通过与包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aRsiRNA慢病毒,利用C3aRsiRNA慢病毒感染人肾足细胞HPC,根据C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特点筛选稳定转染的人肾足细胞。通过荧光定量PCR分析稳定转染的足细胞C3aR的mRNA表达水平,Western blot和免疫组化染色分析稳定转染的肾足细胞C3aR蛋白水平,鉴定稳定转染C3aR低表达的肾足细胞系。结果荧光定量PCR结果显示,与HPC-C3aRsiRNA细胞C3aR的mRNA水平(0.26±0.04)比较,非转染HPC细胞(1.00±0.13)和阴性对照(1.07±0.16)显著升高(P0.05)。免疫组化染色显示HPC-C3aRsiRNA细胞的C3aR蛋白水平显著降低。Western blot结果显示,与HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表达(0.62±0.09)比较,正常HPC、阴性转染的HPC表达(1.00±0.08、1.00±0.22)显著升高(P0.05)。结论成功构建了C3aR低表达的肾足细胞系,可为进一步了解C3aR在肾中的生理作用提供细胞模型。
【作者单位】： 南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所;
【关键词】： 低表达 CaR 转染 人肾足细胞
【基金】：国家自然科学基金(81370828)
【分类号】：R692
【正文快照】： 0引言补体系统是先天免疫系统的重要组成部分,参与具有识别自身和免疫清除等作用,裂解C3成C3a和C3b两部分是其活化的重要过程。C3b可以与免疫复合物、细胞表面及其他相关循环蛋白结合,发挥调理作用[1-2]。C3a通过与其受体过敏性毒素C3a受体(C3aR)结合,发挥起生物学功能。早期，

本文编号：700202