尿源干细胞在促进神经源性膀胱恢复中的研究

发布时间：2017-08-19 14:12

  本文关键词：尿源干细胞在促进神经源性膀胱恢复中的研究

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【摘要】：背景及目的:神经源性膀胱(Neurogenic bladder,NB)是一种由于神经排尿控制系统出现紊乱或功能障碍而导致的尿路功能损害,通常存在神经系统的病变或者创伤。由于脊髓受伤的阶段不同,神经源性膀胱的临床表现也不相同。脊髓损伤后造成的神经源性膀胱膀胱的并发症主要有尿路感染,上尿路和下尿路功能恶化,泌尿系统结石等。其中,上尿路损害和肾功能衰竭是神经源性膀胱造成的最严重的并发症。目前,国内外针对神经源性膀胱仍然缺乏研究,并且尚无统一的治疗金标准,依旧是困扰世界的难题。尿源干细胞是新近发现的一种从人尿液中收集和提取出的细胞,具有与其他干细胞相同的特性,能够自我更新和定向分化。同时,尿源干细胞较其他干细胞更易获取,避免了伦理道题问题。更因其来源于泌尿系统,具有更好的同质性和同源性,在泌尿系统的组织工程修复和疾病治疗中已取得显著效果。本实验研究了尿源干细胞通过尾静脉注射应用在神经源性膀胱大鼠的疾病模型上,观测尿源干细胞对神经源性膀胱大鼠模型膀胱功能的修复情况,为神经源性膀胱提供新的治疗思路和策略。方法1.建立神经源性膀胱模型:本研究采用雌性Sprague-Dawley大鼠(180-200g)作为实验对象,随机分为正常组,损伤组和干细胞组。采用自制的Allen’s打击装置建立大鼠神经源性膀胱模型,干细胞组大鼠模型建立一周后经尾静脉注射尿源干细胞。2.蛋白表达检测:注射干细胞28天后,提取膀胱总蛋白后,使用SDS-PAGE凝胶电泳分离总蛋白并用5%的牛奶封闭后,孵育P2Y4多克隆抗体。孵育二抗后,使用Image系统检测各组间P2Y4蛋白的浓度差异。3.组织学检测:取膀胱组织后立即称取膀胱湿质量,包埋成并制成石蜡切片。分别进行H.E.染色,TUNEL染色。4.功能学检测:每组大鼠在麻醉下通过尿动力学检测观察各组膀胱的功能差异;每组大鼠断颈处死后通过膀胱离体逼尿肌肌条实验观察各组膀胱的收缩差异。结果1.Western Blot法检测显示损伤组大鼠膀胱P2Y4蛋白的表达明显高于正常组和干细胞组大鼠。2.干细胞组大鼠的膀胱湿质量(0.31±0.01)g和膀胱湿质量/体质量比值(1.19±0.41)较模型组大鼠的膀胱湿质量(0.66±0.07)g和膀胱湿质量/体质量比值(2.30±0.26)有明显改善。3.H.E.染色显示损伤组大鼠的膀胱水肿严重,逼尿肌结构紊乱。干细胞组大鼠的膀胱水肿减轻,逼尿肌增厚。TUNEL染色发现损伤组大鼠的膀胱肌细胞凋亡率(59.80±14.18)%,明显高于正常组(8.20±3.13%)和干细胞组(59.80±14.18)%的膀胱肌细胞凋亡率。4.通过尿动力学检测得出,干细胞组大鼠的收缩时间、排尿量较损伤大鼠改善明显(P0.01),但干细胞组大鼠的膀胱基压和膀胱峰压无明显改善(P0.05)。结论在神经源性膀胱的大鼠模型中,尿源干细胞能够一定程度上促进膀胱功能的恢复,减轻水肿和缓解膀胱肥大,改善排尿状况。
【关键词】：神经源性膀胱 尿源干细胞 脊髓损伤 细胞凋亡
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R694.5
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-7
• 中文摘要7-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 材料和方法12-24
• 2.1 实验材料12-17
• 2.2 实验方法17-24
• 第三章 结果24-33
• 3.1 Western Blot检测P2Y4蛋白在膀胱中的表达变化24-25
• 3.2 尿动力学实验25-26
• 3.3 膀胱离体逼尿肌肌条实验26-28
• 3.4 膀胱湿质量和膀胱湿质量/体质量比值28
• 3.5 H.E.染色28-30
• 3.6 TUNEL染色30-33
• 第四章 讨论33-36
• 全文结论36-37
• 参考文献37-41
• 文献综述 神经源性膀胱的评估和管理41-54
• 参考文献49-54
• 攻读硕士学位期间的研究成果54-55
• 致谢55

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本文编号：701156