人脐带间充质干细胞对高糖致足细胞凋亡的作用

发布时间：2017-08-24 06:13

  本文关键词：人脐带间充质干细胞对高糖致足细胞凋亡的作用

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【摘要】：背景：糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症,随糖尿病发病率升高,DN已成为终末期肾病(ESRD)的主要病因。研究表明,在DN的发生和发展中,足细胞凋亡与蛋白尿的产生密切相关,改善和维持足细胞的正常结构和功能可以改善糖尿病肾损伤。临床上DN的治疗以降低血糖、控制血压和减少蛋白尿等对症治疗及肾脏替代治疗为主,目前尚无令人满意的治疗方法。间充质干细胞(MSCs)具有亚全能分化潜能,广泛用于多种疾病的治疗,也为DN的治疗提供了新方向。研究证明,MSCs移植可以降低糖尿病大鼠血糖,减少蛋白尿,改善肾损伤,但其具体机制仍不明确。我们采用高糖刺激足细胞建立凋亡模型,通过MSCs和足细胞共培养探讨MSCs对足细胞凋亡的影响及其作用机制。目的：探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用贴壁法制备人脐带间充质干细胞,对获取的HUC-MSCs通过细胞形态观察,多向分化(成骨诱导分化和成脂诱导分化),流式细胞仪检测细胞表型进行鉴定。小鼠足细胞分为4组：(1)正常糖组(NG)；(2)高糖组(HG)；(3)甘露醇渗透压对照组(NG+MA);(4)HUC-MSCs和足细胞transwell共培养组(HUC-MSCs)。分别刺激72h后,检测足细胞凋亡指标,包括蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白PARR、Bcl-2的表达,采用流式细胞术检测足细胞凋亡率,Hoechst染色检测足细胞凋亡水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HUC-MSCs分泌HGF水平。同时,采用HGF抗体中和HGF以消除其作用,或加入rhHGF模拟MSC作用,探讨HGF在HUC-MSCs抗凋亡机制中的作用。结果：1.制备培养的HUC-MSCs呈长梭形,平行或漩涡状排列；油红O染色发现细胞浆有染成红色的油滴空泡；茜素红染色发现细胞浆中有染成酒红色的钙沉积；流式细胞术检测HUC-MSCs高表达常用的人间充质干细胞标记CD90(98.5%),CD105(64.3%),CD73(96.3%)；不表达造血细胞标记CD34(0.3%),CD45(0.5%)。2.高糖刺激24、48、72h后,足细胞PARP的表达增多,且随刺激时间延长而持续增高。各实验组处理72h后,检测凋亡相关指标。免疫印迹法显示：与NG组比较,HG组凋亡标志蛋白PARP的表达增多、Bcl-2表达减少(P0.05),与HG组比较,HUC-MSCs共培养组PARP的表达减少、Bcl-2表达增加(P0.05)。流式细胞术显示：与NG组比较,HG组足细胞凋亡率增多(P0.05)；与HG组比较,HUC-MSCs共培养组足细胞凋亡率减少(P0.05)。Hoechst染色显示：HG组足细胞细胞核出现花瓣状或固缩变小,呈现典型凋亡形态；HUC-MSCs共培养组细胞核形态正常,呈长椭圆形,无凋亡细胞核改变。与NG组比较,HG组足细胞凋亡率增多(P0.05)；与HG组比较,HUC-MSCs共培养组足细胞凋亡率减少(P0.05)。NG+Ma组无上述凋亡指标的改变。3. ELISA检测HUC-MSCs分泌大量HGF。加入rhHGF后,与高糖组比较,rhHGF组PARP的表达减少、Bcl-2表达增加(P0.05),足细胞凋亡率减少(P0.05),细胞核形态正常,呈长椭圆形,无凋亡细胞核改变。与HUC-MSCs组比较,加入HGF中和抗体后PARP的表达增多,Bcl-2表达减少(P0.05)足细胞凋亡率增多(P0.05),足细胞细胞核出现花瓣状或固缩变小,呈现典型凋亡形态。结论：1. HUC-MSCs可以减轻高糖诱导的足细胞凋亡。2. HUC-MSCs对高糖诱导足细胞凋亡的保护作用可能与分泌HGF有关。
【关键词】：糖尿病肾病 间充质干细胞 足细胞 凋亡
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-25
• 讨论25-30
• 结论30-31
• 附图表31-38
• 参考文献38-42
• 综述42-52
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 攻读学位期间发表的学术论文53-54
• 学位论文评阅及答辩情况表54

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本文编号：729653