骨髓间充质干细胞修复大鼠体外循环急性肾损伤的研究

发布时间：2017-08-29 18:39

  本文关键词：骨髓间充质干细胞修复大鼠体外循环急性肾损伤的研究

  更多相关文章： 间充质干细胞 体外循环 急性肾损伤 大鼠

【摘要】：目的：探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)对大鼠体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的保护作用及机制方法1、采用密度梯度离心法、贴壁分离法原代分离、培养、纯化绿色荧光蛋白转基因(enhanced green fluorescent protein transgenic, eGFP)大鼠骨髓MSC。2、成年雄性SD大鼠72只,体重(288.8±26.1)g,随机分为：sham组、CPB组和CPB+MSC组。sham组穿刺但不实施体外循环；其余两组建立CPB模型,CPB+MSC组于转流结束后经右侧颈外静脉注射1.5*106 MSCs。于术后6h、24h、48h取血清及肾标本。检测血清Cr、IL-10、IL-6及肾组织VEGF、IGF-1的含量,并切片观察肾组织损伤及MSC的归巢。结果1、成功分离、提取MSC,培养至第3代时形成漩涡状、纺锤形、形态相对均一的贴壁细胞,荧光显微镜下可观察大片具有绿色荧光表达的MSC,流式细胞检测CD29、CD90、CD45、CD34的表达率分别为99.74%、98.01%、0.16%、14.09%。2、建立大鼠CPB-AKI模型(成功率90%)。①比较各组血清Cr、IL-6水平发现,M组、C组较S组显著升高(P0.05),且M组在各时间点对应水平低于C组(P0.05)。而各组血清IL-10比较发现,M组较C组显著升高(P0.05),同时M组在各时间点对应水平高于C组(P0.05)。②比较肾组织VEGF、IGF-1的表达发现,M组水平较C组增高。③观察各组肾脏病理切片显示,M组较C组损伤减轻。冰冻切片观察eGFP-MSC大量积聚于肺组织中最多,肾脏几乎未观察到归巢。结论1、右侧颈外静脉及双侧股动脉插管,能够成功在体重224-320g雄性SD大鼠上建立CPB-AKI模型(成功率90%)2、MSC能够对CPB-AKI的产生保护作用,可能是通过旁分泌具有抗炎及细胞保护作用的活性因子,完成对机体免疫系统的调节及损伤组织的修复。
【关键词】：间充质干细胞 体外循环 急性肾损伤 大鼠
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 中英文对照缩写9-11
• 前言11-13
• 文献综述 骨髓间充质干细胞治疗急性肾损伤的机制探讨13-20
• 第一章 资料与方法20-23
• 1 实验动物与材料20
• 2 eGFP大鼠骨髓MSC的分离、培养和鉴定20
• 3 实验动物分组及建立CPB模型20-21
• 4 治疗处理21
• 5 标本收集及检测21-22
• 6 统计学分析22-23
• 第二章 结果23-27
• 1 eGFP-MSC的形态23
• 2 eGFP-MSC的鉴定23-24
• 3 血清Cr、IL-6、IL-10的水平24
• 4 肾组织VEGF、IGF-1的表达24-25
• 5 肾组织病理改变25-26
• 6 eGFP-MSC的定位26-27
• 第三章 讨论27-29
• 第四章 结论29-30
• 参考文献30-40
• 致谢40-41
• 作者简介41
• 研究生期间发表的论文41-42

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本文编号：754851