Sunitinib经STAT3通路抑制LPS诱导树突状细胞表达PD-L1的实验研究

发布时间：2017-09-20 15:23

  本文关键词：Sunitinib经STAT3通路抑制LPS诱导树突状细胞表达PD-L1的实验研究

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【摘要】：目的研究分子靶向药物舒尼替尼(sunitinib)对肾癌患者外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)表面表达的共抑制分子程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及疱疹病毒侵入介体(HVEM)表达的影响以及探讨sunitinib是否经过STAT3信号通路调控DC表面共抑制分子的表达变化,为sunitinib联合DC免疫治疗提供一定的理论依据。方法体外诱导培养肾癌患者外周血单核细胞来源的DC,随机分为sunitinib联合LPS组、LPS组、STAT3通路特异性阻断剂JSI-124联合LPS组及DMSO组。Sunitinib联合LPS组用200 ng/m L sunitinib预处理DC12 h,再用1μg/m L脂多糖(LPS)刺激24h;LPS组用1μL/m L DMSO预处理12h,再用1μg/m L LPS刺激24h;JSI-124联合LPS组用500 nmol/m L JSI-124预处理12h,再用1μg/m L脂多糖(LPS)刺激24h;DMSO组用1μL/m L DMSO作用36h。倒置显微镜观察各组形态变化;台酚蓝染色法检测各组DC活性;流式细胞仪检测各组DC表型HLA-DR、CD83及CCR7表达变化和DC表面共抑制分子PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及HVEM表达水平;蛋白印迹实验(Westren blot)检测各组STAT3蛋白及磷酸化-STAT3蛋白(p-STAT3)的变化。应用SPSS19.0软件分析,所有数据以均数±标准差(x_+s)表示,方差齐性检验(Levene检验)后,进行两样本t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果1.倒置显微镜观察发现,随着培养时间的增长,可见各组贴壁细胞呈集落生长,逐渐增大,细胞逐渐呈半悬浮状态,细胞体积变大,形状不规则,表面突起明显。经LPS诱导24h后,sunitinib联合LPS组和LPS组的细胞显著增大,毛刺状更明显,表现为典型的“树枝状”形态,而JSI-124组联合LPS组的细胞显著变大变圆,毛刺状不明显,且细胞均呈悬浮状态。另外,DMSO组的DC形态变化不明显。2.通过台盼蓝染色法检测各组DC活性,根据公式:活细胞率(%)=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%,计算得出,与LPS组相比,各组活细胞率均无明显差异。3.流式细胞术检测结果显示,本研究DC的百分比为79.92%,获得了较高纯度的DC;各组DC表型CCR7、CD83、HLA-DR分析:与LPS组相比,sunitinib联合LPS组和DMSO组的CCR7百分比显著减低(P0.01);sunitinib联合LPS组的CD83百分比高于LPS组,而LPS组明显高于DMSO组(P0.01);另外,在各组表达HLA-DR的平均荧光强度中,sunitinib联合LPS组和JSI-124联合LPS组均无显著差异,而DMSO组明显低表达(P0.01)。各组DC共抑制分子分析:相比较LPS组,sunitinib联合LPS组表达的B7-H4百分比和PD-L1、CD80平均荧光强度均显著减低(P0.01,P0.05,P0.01),而PD-L2、CD86及HVEM平均荧光强度却无明显差别;JSI-124联合LPS组表达PD-L1的平均荧光强度降低(P0.05),CD80、CD86、PD-L2、B7-H4及HVEM无显著差异;DMSO组的各共抑制分子PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及HVEM均呈低水平表达(P0.01)。4.sunitinib联合LPS组、JSI-124联合LPS组及DMSO组的p-STAT3蛋白灰度比分别为1.24±0.11、0.51±0.1、0.02±0.004均低于LPS组2.1±0.3,而STAT3蛋白灰度比无明显变化。结论1.LPS诱导肾癌患者外周血单核细胞来源的DC快速成熟,sunitinib不影响DC的形态变化。2.LPS促进DC表达抑制性信号,而sunitinib降低LPS诱导DC的共抑制分子PD-L1、CD80及B7-H4的表达,抑制表达部分抑制性信号。3.Sunitinib抑制LPS诱导DC的STAT3信号通路活化。4.STAT3通路调控LPS诱导DC表达PD-L1。5.Sunitinib可能经STAT3通路抑制LPS诱导DC表达共抑制分子PD-L1。结论
【关键词】：舒尼替尼 树突状细胞 共抑制分子
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-25
• 结果25-32
• 讨论32-36
• 结论36-37
• 参考文献37-43
• 附录43-44
• 致谢44-45
• 综述45-56
• 参考文献51-56

【参考文献】

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1 赵飞龙;麦海星;董金凯;李学超;汤永永;陈立军;张斌;;舒尼替尼抑制小鼠骨髓来源树突状细胞表面PD-L1和PD-L2的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2015年01期

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本文编号：888840