Sirt1过表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞株凋亡的影响及机制研究

发布时间：2017-09-23 09:40

  本文关键词：Sirt1过表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞株凋亡的影响及机制研究

  更多相关文章： Sirt1 TGF-β1 CTGF 人肾小管上皮细胞 凋亡

【摘要】：目的:肾间质纤维化是肾脏疾病终末期的共同特征。肾小管上皮细胞可通过多种方式主动参与肾间质纤维化的发生与发展。在多种肾脏疾病的动物模型以及人体多种肾脏疾病病理标本上发现,间质纤维化愈重的地方,细胞凋亡数量愈多,间质纤维化程度与细胞凋亡数量成正相关。本研究着重观察Sirt1过表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制研究。方法:将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常对照组、TGF-β1刺激组及TGF-β1+Sirt1过表达组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术及hoechst33258染色法分别检测细胞凋亡百分比;Western blot检测Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2的表达;real time-PCR检测Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2m RNA水平;活性比色法检测Sirt1活性;免疫细胞化学方法检测Sirt1表达。结果:①TGF-β1对人肾小管上皮细胞Sirt1蛋白及m RNA表达水平的影响:较正常对照组相比,TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞Sirt1m RNA及蛋白表达均显著降低(P0.01)。免疫细胞化学检测显示,Sirt1主要表达于人肾小管上皮细胞的细胞核,对照组呈强表达,TGF-β1刺激组的Sirt1表达显著低于正常对照组。②TGF-β1对Sirt1活性的影响:活性比色法定量检测显示TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞Sirt1活性较正常对照组显著降低(P0.01)。③转染Sirt1质粒后人肾小管上皮细胞Sirt蛋白、m RNA及活性的改变:Sirt1m RNA、蛋白表达及活性在Sirt1质粒转染组人肾小管上皮细胞表达显著升高(P0.01),表明Sirt1基因成功导入了人肾小管上皮细胞,并在蛋白水平获得高效表达。④Sirt1过表达对TGF-β1诱导的CTGF升高及小管上皮细胞凋亡相关指标影响:与正常对照组相比,TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞Bcl-2水平显著降低(P0.01),Bax、CTGF水平显著升高(P0.01)。Sirt1过表达能够显著上调TGF-β1诱导的Bcl-2减少(P0.01),降低TGF-β1诱导的Bax、CTGF的增多(P0.01)。⑤Sirt1过表达对TGF-β1诱导的人小管上皮细胞凋亡百分比影响:Hoechst、TUNEL及FCM三种检测细胞凋亡技术均显示,与正常对照组相比,在TGF-β1刺激下,人肾小管上皮细胞凋亡百分比显著增加(P0.01);与TGF-β1刺激组相比,Sirt1过表达能够显著减少TGF-β1诱导的细胞凋亡百分比(P0.05)。结论:1在TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞时CTGF表达明显升高,Sirt1表达显著下降,同时细胞凋亡明显增加。这些结果提示TGF-β1/CTGF信号传导途径及Sirt1下降可能因为与细胞凋亡密切相关而参与了肾间质纤维化的发生、发展过程。2 Sirt1过表达能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,并且改善CTGF水平升高,提示Sirt1过表达保护作用的实现可能是部分通过抑制CTGF实现的。
【关键词】：Sirt1 TGF-β1 CTGF 人肾小管上皮细胞 凋亡
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文缩写8-9
• 前言9
• 材料与方法9-17
• 结果17-19
• 附图19-20
• 附表20-21
• 讨论21-24
• 结论24-25
• 参考文献25-28
• 综述 Sirt1和炎症28-39
• 参考文献34-39
• 致谢39-40
• 个人简历40

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 安会江,朝克,商战平,包宏,赵宗孝,岳诚真,庞铁光;实验性单侧输尿管梗阻的肾脏形态学变化[J];基础医学与临床;1999年03期

，

本文编号：904557