FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

发布时间：2017-09-26 18:17

  本文关键词：FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

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【摘要】：目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Fox M1 sh RNA重组慢病毒载体,并构建筛选Fox M1敲低的人前列腺癌稳定细胞株,检测Fox M1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法设计并合成3对特异性针对人Fox M1基因的sh RNA靶序列,构建到p HBLV-U6-Zs Green-Puro慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞,Real-time PCR检测各组细胞Fox M1 m RNA水平,经嘌呤霉素筛选建立Fox M1敲低稳定细胞株,用Western blotting法检测细胞中Fox M1表达,并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性,流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况,平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果经测序鉴定成功构建了3对Fox M1sh RNA慢病毒载体,并进行包装,感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳,嘌呤霉素抗性筛选建立了Fox M1敲低稳定细胞株,荧光显微镜观察感染效率较高,Western blotting结果显示细胞中Fox M1蛋白表达明显受到抑制,细胞的生长增殖能力明显受限,流式细胞术结果显示Fox M1敲低组细胞凋亡率高于对照组,平板克隆实验结果表明Fox M1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论本研究成功构建了Fox M1 sh RNA慢病毒载体,建立了Fox M1敲低稳定前列腺癌细胞株,抑制细胞内Fox M1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力,并能诱导细胞凋亡。
【作者单位】： 解放军总医院超声科;解放军军事医学科学院放射与辐射研究所;
【关键词】： Fox M 前列腺癌 慢病毒载体 稳定细胞株
【基金】：国家自然科学基金(81471682)~~
【分类号】：R737.25
【正文快照】： 前列腺癌是威胁老年男性生命健康的常见肿瘤之一,西方发达国家其发病率排在男性恶性肿瘤发病率首位,死亡率位居第2位[1]。2012中国肿瘤登记年报统计数据显示前列腺癌是我国男性发病排名第6位的恶性肿瘤,其发病率和死亡率逐年上升。这与医疗水平的提高,人民寿命的延长,生活方式

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本文编号：924997