含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-09-29 07:27

  本文关键词：含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定

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【摘要】：目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒表达载体(GV287-SCL),为糖尿病膀胱异常病症(DCP)的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增,与慢性病毒穿透质粒结合,构建重组穿梭质粒GV287-EGFP/SCL,共转染293T细胞,通过多次感染、扩增和提纯,得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293T细胞,采用Western blotting法检测目的基因,荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1 036 bp,与目的基因相关片段中SCL c DNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带,其大小与目的片段人SCL c DNA相当。重组质粒GV287-EGFP/SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP,基因排序和Gen Bank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108TU/m L。结论成功构建了GV287-SCL,病毒滴度为5×108TU/m L。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。
【作者单位】： 石河子大学医学院;石河子大学医学院附属第一医院;
【关键词】： 糖尿病膀胱异常病症 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 Cajal样间质细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81360120)
【分类号】：R587.2;R694
【正文快照】： 糖尿病膀胱异常病症(DCP)为糖尿病末期常见的并发症之一,发生率为19%~84%;其临床表现为遗尿、尿不净等,末期会出现尿路感染、肾炎等,最终发展成尿毒症,发生机制目前尚不明确[1]。近年研究发现,膀胱逼尿肌会出现自发性收缩,此收缩完全受到Cajal样细胞的调节[2]。DCP患者受高血

【参考文献】

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本文编号：940723