IgA肾病患者外周B淋巴细胞miR-374b致病机制研究

发布时间：2017-10-03 12:37

  本文关键词：IgA肾病患者外周B淋巴细胞miR-374b致病机制研究

  更多相关文章： MiR-374b B淋巴细胞 IgA1 O-糖基化 IgA肾病

【摘要】：目的：IgA肾病(IgAN)是世界最常见的原发性肾小球疾病,也是导致终末期肾衰的重要原因。在中国约45%的原发性肾小球肾炎患者表现为IgAN。IgAN患者IgA1分子铰链区O-糖链半乳糖基减少,异常糖基化的IgA1在系膜区沉积,导致系膜活化和肾脏损伤。但目前为止IgAN患者低糖基化IgA1的发生机制尚未完全阐明。多种证据表明miRNAs可参与基因的转录后调控,并且在包括肾脏疾病在内的多种疾病的发生发展中起到重要作用。我们在前期芯片分析中发现IgAN患者外周B淋巴细胞中miR-374b显著上调。本研究验证了miR-374b表达水平变化及其临床意义,并深入研究了miR-374b的致病机制。方法：入组30例在南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心行肾穿刺明确诊断为原发性IgAN患者,肾活检病理检查包括光镜和免疫病理,部分病例行电镜检查以排除薄基底膜肾病。临床上已排除诸如过敏性紫癜、肝硬化等继发性IgAN。正常对照组由15名健康志愿者组成,收集血液标本。经抗-CD19磁珠分离外周血B淋巴细胞,利用RT-PCR, western blot(WB)及原位杂交(ISH)或原代培养等技术进行相关分析。利用HAA凝集素结合实验分析患者血清及细胞培养基上清液中IgA1异常糖基化水平。通过双荧光素酶报告基因检测miRNA结合靶点。MiR-374b转染B淋巴细胞,观察靶基因Cosmc和PTEN表达水平,并检测B淋巴细胞增殖速度。本研究符合赫尔辛基宣言原则并经南京军区南京总医院伦理委员会审查通过。结果：IgAN患者平均年龄34.8±12.1岁,男/女性别比16/14,24h尿蛋白、尿沉渣红细胞、血清肌酐分别为1.53±1.19g/d、157.0(63.0～290.0)×104/ml、1.09±0.49mg/d1。在IgAN患者B淋巴细胞中Cosmc和PTEN的mRNA和蛋白水平明显下降,并分别与IgA1异常糖基化水平及B淋巴细胞计数正相关。最近有研究报道,在IgAN患者外周血单核细胞(PBMCs)中有37个差异表达的miRNAs,在这些差异表达的miRNAs中,miR-374b表达增加。我们利用抗CD19磁珠分离IgAN患者外周血B淋巴细胞,并分析miRNAs表达谱发现miR-374b在IgAN患者B淋巴细胞中表达水平显著升高。经相关分析,我们发现miR-374b可能靶向PTEN和Cosmc。而且,IgAN患者miR-374b水平与MEST评分和蛋白尿水平正相关。通过荧光素酶报告基因检测和WB证实miR-374b可靶向PTEN和Cosmc。对来自正常对照B淋巴细胞原代培养后转染miR-374b mimics,可降低内源性PTEN和Cosmc水平,并且导致B淋巴细胞增殖和异常糖基化IgA1的产生。相反,抑制原代培养的B淋巴细胞中miR-374b表达,可增加PTEN和Cosmc水平,并可抑制B淋巴细胞增殖和异常糖基化IgA1的产生。结论：IgAN患者miR-374b表达上调通过靶向PTEN和Cosmc促进B淋巴细胞增殖和IgA1异常糖基化。抑制miR-374b可阻止B淋巴细胞增殖和IgA1异常糖基化,可能成为治疗IgAN的新方法。
【关键词】：MiR-374b B淋巴细胞 IgA1 O-糖基化 IgA肾病
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.31
【目录】：

• 高频英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-24
• 1. 材料14-16
• 2. 方法16-23
• 统汁学分析23-24
• 结果24-31
• 讨论31-34
• 全文总结34
• 创新性34-35
• 参考文献35-39
• 综述：IGA肾病发病机制研究进展39-57
• 引言39
• IGAN中的GD-IGA1及抗GD-IGA1抗体39-42
• 基于基因组研究的其它发现42-44
• IGAN IGA1分泌细胞中的信号通路44-46
• MICRORNA在IGAN中的作用46-49
• 小结49-51
• 参考文献51-57
• 附录57-59
• 硕士期间工作58-59
• 致谢59-60

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4 王华;;淋巴细胞增殖试验作为毒物暴露生物指标的可能性[J];国外医学(卫生学分册);1992年04期

5 张志慧;陈金亮;王殿华;;龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎发病情况、T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响[J];时珍国医国药;2008年06期

6 仲人前;体外测定B淋巴细胞增殖法[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1989年01期

7 聂小华,史宝军,敖宗华,尹光耀,金坚,陶文沂;黄芪活性成分的提取及其对淋巴细胞增殖的影响[J];无锡轻工大学学报;2003年04期

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2 宋朋红;谢海洋;郑树森;吴健;;蛋白酶体抑制剂对T淋巴细胞增殖活化的影响[A];2004年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2004年

3 贾永前;曾婷婷;潘晓夫;李亚琼;范家凤;孟文彤;;骨髓间充质干细胞及转基因骨髓间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

4 白彦萍;陈志华;李红艳;杨顶权;;常用中药静脉注射剂对T淋巴细胞增殖的影响的比较[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年

5 吴岚;赵丽娟;杨娉婷;鲁静;肖卫国;;红霉素对T淋巴细胞增殖的影响[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年

6 朱平;;移植后淋巴细胞增殖病的病因和临床诊治[A];第一届全国难治性淋巴瘤学术研讨会暨第二届全国多发性骨髓瘤学术研讨会（国家级血液系统恶性肿瘤继续医学教育学习班）继续教育集[C];2007年

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