内源性ω-3 PUFAs增加对小鼠体重及肠道益生菌的影响

发布时间：2017-10-10 08:18

  本文关键词：内源性ω-3 PUFAs增加对小鼠体重及肠道益生菌的影响

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【摘要】：目的以fat-1转基因小鼠为模型,提高内源性ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)水平,研究对小鼠体重的影响,及其作用机理。方法采用fat-1转基因小鼠与普通C57/BL6小鼠杂交,获得同窝雄性小鼠。通过基因鉴定,将6周龄小鼠分为fat-1转基因组和非转基因组。每周测量小鼠体重和体长,持续8周。实验结束时处死两组小鼠,称量小鼠内脏周围脂肪质量;取血测定各组小鼠血清中血糖(BG)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;采用荧光定量PCR,对下丘脑饮食相关基因Neuropeptide Y(NPY)、Cocaine and amphetamine regulated transcript(CART)、Agouti-related peptides(Ag RP)、Proopiomelanocortin(POMC)、Ghrelin和Nestifatin-1以及粪便中益生菌Bifidobacteria(Bif)和Lactobacillius(Lac)进行相对定量分析;采用Western blotting,对小肠组织LC3及P62分析。结果转基因小鼠的体重/体长明显低于非转基因小鼠(P0.05);转基因小鼠血清中BG、TG、TC水平均低于非转基因小鼠,且存在显著性差异(P0.05);转基因小鼠肠道菌群中的益生菌Bif和Lac表达量明显高于非转基因小鼠(P0.05)。fat-1小鼠与其同窝野生型小鼠相比,体内下丘脑饮食相关基因NPY、Ag RP、和Nestifatin-1 m RNA的相对表达量显著下调(P0.05),CART、POMC和Ghrelin m RNA的相对表达量显著上调(P0.05)。小肠组织中LC3II/I,转基因小鼠均比非转基因小鼠表达量高(P0.05),Sequestosome-1(P62)在转基因小鼠中比非转基因小鼠表达量低,并且差异具有统计学意义(P0.05)。结论fat-1转基因小鼠体内含有的ω-3 PUFA脱氢酶增加了其体内内源性ω-3 PUFAs,从而降低体内ω-6/ω-3 PUFAs比值,影响了小鼠下丘脑饮食相关基因的表达及小肠组织中自噬的情况,因而降低了小鼠体重并有利于益生菌的增加。
【关键词】：ω-3 PUFA 体重 下丘脑饮食相关基因 自噬 肠道益生菌
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 实验材料8-11
• 1.1 实验器材8
• 1.2 配方及试剂8-9
• 1.3 实验动物9-10
• 1.4 样本10
• 1.5 常用软件及数据库10-11
• 第二章 实验方法11-20
• 2.1 小鼠体重、体长及脏器周围脂肪重量的测定11
• 2.2 鼠尾DNA的鉴定11-12
• 2.3 粪便样品的处理及肠道细菌总DNA的提取12-13
• 2.4 质粒构建13-14
• 2.4.1 感受态、载体、引物及测序13
• 2.4.2 目的片段的扩增13
• 2.4.3 PCR产物的回收13-14
• 2.4.4 基因克隆文库的构建及测序14
• 2.4.4.1 连接反应14
• 2.4.4.2 质粒转化、阳性克隆的挑选及送测14
• 2.5 血清相关指标的测定14-15
• 2.5.1 血糖（BG）的测定14-15
• 2.5.2 甘油三酯（TG）的测定15
• 2.5.3 总胆固醇（TC）的测定15
• 2.6 RNA提取15-16
• 2.7 实时荧光定量PCR16-17
• 2.7.1 肠道菌群的实时定量16-17
• 2.7.2 下丘脑饮食相关基因的实时定量17
• 2.8 Western Blot检测LC3和P62蛋白表达17-19
• 2.8.1 蛋白样品的制备17
• 2.8.2 Western Blot17-19
• 2.8.2.1 SDS-电泳17-18
• 2.8.2.2 电转18
• 2.8.2.3 免疫反应18-19
• 2.8.2.4 化学发光、显影、定影19
• 2.9 数据处理19-20
• 第三章 实验结果20-26
• 3.1 鼠尾DNA鉴定结果20
• 3.2 体重/体长分析结果20-21
• 3.3 血糖及血清的相关指标21-22
• 3.4 脏器周围脂肪重量的测定结果22
• 3.5 肠道益生菌测定分析结果22-23
• 3.6 下丘脑饮食相关基因的mRNA相对表达量分析23-24
• 3.7 自噬相关基因LC3和P62在小肠组织中的表达24-26
• 第四章 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-35
• 综述35-42
• 综述参考文献39-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 致谢43-44

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本文编号：1005290