百草枯中毒小鼠脑损害后NGF、NOS免疫组化表达及环孢素A的治疗作用研究

发布时间：2017-10-15 22:00

  本文关键词：百草枯中毒小鼠脑损害后NGF、NOS免疫组化表达及环孢素A的治疗作用研究

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【摘要】：目的:通过给C57BL/6小鼠腹腔注射一定剂量的20%的百草枯农药,让小鼠处于慢性百草枯中毒的环境中,小鼠会逐步的出现一系列脑损害的症状,并进一步检测免疫组化抗体如神经生长因子(NGF)、一氧化氮合酶(NOS)等在不同组小鼠脑组织中的表达,进而探讨百草枯是否对小鼠脑组织有损害,并研究环孢素A对百草枯所致的小鼠脑中毒的治疗作用。方法:选择C57BL/6种类小鼠6周左右大小,一共30只,随机分为对照组和实验组,实验组又分为实验组Ⅰ和实验组Ⅱ:对照组小鼠(10只),实验组Ⅰ小鼠(10只),实验组Ⅱ小鼠(10只);分别给对照组小鼠腹腔注射10mg/Kg的生理盐水、给实验组(实验组Ⅰ和实验组Ⅱ)小鼠腹腔注射10mg/Kg的浓度为20%百草枯水溶液,每周腹腔注射两次,选择在每周一和每周四的上午,一共连续腹腔注射时长为2个月(8周)左右的时间。三组小鼠放在同样的条件下饲养,在三组小鼠连续腹腔注射百草枯2个月后,再给实验组Ⅱ的小鼠腹腔注射5mg/kg的环孢素A溶液,此时,对于对照组和实验组Ⅰ的小鼠暂时不做任何处理。在整个实验过程中,动态观察并测试不同组的小鼠在一般形态、行动、毛发上的变化,并测定小鼠在行为学的变化和差异(小鼠的水迷宫实验)。最后同时处死三组小鼠,加以解剖,将三组小鼠的脑组织取出并进行固定、脱水、石蜡包埋、切片、染色等并研究和对比NGF、NOS等免疫组化在不同组小鼠脑组织的表达。结果:1、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ的C57BL/6小鼠在百草枯连续腹腔给药过程中,逐步出现轻微震颤、动作僵硬,毛发颜色变黄、变稀疏、运动迟缓、运动不协调、躲避刺激能力减弱、竖毛等表现。而对照组小鼠关于这方面的表现在给百草枯的前后时间里并没有明显的变化。2、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ的小鼠较对照组小鼠在“水迷宫实验”中穿过平台次数明显减少。实验组Ⅱ的小鼠在腹腔注射环孢素A之后,其在行为学上症状没有得到明显的改善,较实验组Ⅰ小鼠差异无明显差异。3、实验组Ⅰ的小鼠脑组织NGF、NOS免疫组化染色表达强阳性,主要分布和表达在大脑皮层和纹状体等处;实验组Ⅱ的小鼠脑组织NGF、NOS对比实验组Ⅰ的小鼠表达有所减少,表达的部位与实验组Ⅰ大致相同。4、检测发现对照组小鼠脑组织在大脑皮层和纹状体处NGF、NOS免疫组化也有一定程度的表达,但表达的量明显少于实验室Ⅰ和实验组Ⅱ的小鼠。结论:1、模拟一个慢性的、低浓度的百草枯中毒的环境,同时让C57BL/6小鼠置身于此环境中,小鼠逐步会出现动作和四肢轻微的震颤、僵硬,毛发颜色变黄、变稀疏、运动迟缓、运动不协调、躲避刺激能力减弱等表现、且通过对小鼠行为学进行客观的检测,可以发现小鼠在行为学上可以产生明显的差异,非常的类似临床上患有帕金森病患者的临床症状,因此我们可以认为慢性的低剂量的百草枯可以引起小鼠脑组织发生损伤。2、实验组Ⅱ的NGF、NOS阳性细胞数大于实验组Ⅰ和对照组,说明环孢素A对百草枯中毒小鼠脑损害有一定治疗作用。3、经腹腔注射环孢素A治疗的实验组Ⅱ的小鼠,发现其脑组织的NGF、NOS表达较实验组Ⅰ明显减少,这说明环孢素A对于百草枯在脑内造成损害有一定程度的抑制作用,由此可以推测环孢素A可能对帕金森病的治疗有一定的意义。但实验组Ⅱ和实验组Ⅰ的小鼠行在为学上的改变没有明显的差异,因此认为5mg/kg剂量的环孢素A并没有明显改善百草枯损伤小鼠脑损害的症状。
【关键词】：百草枯 脑损害 神经生长因子 一氧化氮合酶
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R595.4
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-17
• 研究材料和方法17-22
• 1 百草枯脑损害的研究17-20
• 1.1 材料、试剂和仪器17
• 1.2 诱导小鼠产生帕金森症状17-18
• 1.3 小鼠脑组织HE切片染色制作18-20
• 2 小鼠脑组织NGF、NOS抗体的免疫组化染色20-22
• 2.1 材料、试剂和仪器20
• 2.2 免疫组化步骤（SABC 法）20-22
• 结果22-35
• 讨论35-42
• 结论42-43
• 参考文献43-49
• 综述 百草枯诱导小鼠帕金森病动物模型发病机制的研究49-56
• 参考文献54-56
• 作者简介及读研期间主要科研成果56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1038917