miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

发布时间：2017-10-25 03:33

  本文关键词：miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

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【摘要】：microRNAs(miRNAs)是一类长约21~25 nt的非编码小分子RNA,已有大量研究表明miRNAs参与调控脂肪形成。但miR-23b-3p在脂肪形成中的作用未见报道。本研究选用3T3-L1前脂肪细胞作为研究对象,探讨miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的影响。通过化学合成的mi R-23b-3p模拟物mimic和抑制物inhibitor成功转入3T3-L1前脂肪细胞后,利用CCK-8法和流式细胞术检测miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;并通过实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞周期基因CyclinD1和CDK4以及成脂标志基因PPARγ和FABP4的表达情况;油红O染色测定甘油三酯积累情况。得到如下结果:1.过表达miR-23b-3p抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,导致细胞G1期阻滞,CyclinD1和CDK4在mRNA和蛋白水平极显著下调;抑制miR-23b-3p的表达能够促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,G1期细胞比例减少,CyclinD1和CDK4在m RNA和蛋白水平显著或极显著上调。2.在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中,miR-23b-3p的表达水平上调。3.过表达miR-23b-3p,甘油三酯积累增加,PPARγ和FABP4在m RNA和蛋白水平显著或极显著上调;抑制miR-23b-3p表达,甘油三酯积累减少,PPARγ和FABP4在mRNA和蛋白水平极显著下调。结论:miR-23b-3p能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖并促进其分化为成熟脂肪细胞。
【关键词】：miR-23b-3p 3T3-L1前脂肪细胞 细胞增殖 细胞分化
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-18
• 1.1 microRNAs9-11
• 1.1.1 microRNAs的发现9
• 1.1.2 microRNAs的特征9
• 1.1.3 microRNAs的生物合成过程及作用机制9-11
• 1.2 细胞周期11-12
• 1.2.1 细胞增殖11
• 1.2.2 细胞周期的调控11-12
• 1.3 脂肪形成概述12-14
• 1.3.1 脂肪组织的形成和功能12-13
• 1.3.2 脂肪细胞分化过程13
• 1.3.3 脂肪细胞分化的分子调控13-14
• 1.4 microRNAs与脂肪形成14-17
• 1.4.1 microRNAs参与调节脂肪细胞增殖14-15
• 1.4.2 microRNAs促进脂肪细胞分化15-16
• 1.4.3 microRNAs抑制脂肪细胞分化16-17
• 1.5 研究目的与意义17-18
• 2 材料与方法18-28
• 2.1 材料18-21
• 2.1.1 细胞系18
• 2.1.2 主要试剂18-19
• 2.1.3 主要仪器19
• 2.1.4 主要试剂配方19-21
• 2.2 方法21-28
• 2.2.1 成脂诱导分化21-22
• 2.2.2 miR-23b-3p寡核苷酸转染22
• 2.2.3 细胞总RNA的提取及qPCR22-25
• 2.2.4 细胞活力测定25
• 2.2.5 细胞周期检测25-26
• 2.2.6 细胞总蛋白的提取及浓度测定26-27
• 2.2.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，，转膜及显影27-28
• 2.2.8 统计学分析28
• 3 结果与分析28-36
• 3.1 miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响28-33
• 3.1.1 过表达miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响28-29
• 3.1.2 miR-23b-3p过表达导致 3T3-L1前脂肪细胞G1期阻滞29-31
• 3.1.3 抑制miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响31
• 3.1.4 抑制miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞周期的影响31-33
• 3.2 过表达miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响33-36
• 3.2.1 miR-23b-3p在 3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中表达上调33
• 3.2.2 过表达miR-23b-3p促进 3T3-L1前脂肪细胞分化33-34
• 3.2.3 抑制miR-23b-3p对 3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响34-36
• 4 讨论36-39
• 5 结论39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-47

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本文编号：1091906