家蚕高蛋白血症对脂肪体重塑及其功能的影响

发布时间：2017-10-28 03:22

  本文关键词：家蚕高蛋白血症对脂肪体重塑及其功能的影响

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【摘要】：高蛋白血症是临床常见的严重代谢疾病。由于缺乏可靠的高蛋白血症动物模型,相关发病机制探究还有诸多不明之处。本实验室利用无脊椎模式动物家蚕构建了高蛋白血症疾病模型,发现了疾病模型家蚕的幼虫-蛹变态期的出现了脂肪体重塑与生理功能障碍,为此,本文研究了高蛋白血症影响家蚕脂肪体重塑的机制及其生理功能的影响。结果如下:1高蛋白血症引起变态期家蚕脂肪体重塑异常本实验室构建的转基因突变体TBH家蚕是一个能够正常继代的轻症高蛋白血症遗传品系,其后部丝腺合成的丝蛋白质不能正常分泌至体外,导致幼虫-蛹变态期丝腺退化释放更多的蛋白至血淋巴,在蛹期出现1周左右的血淋巴蛋白浓度极度升高。我们另一种快速建立重症高蛋白血症家蚕(简记为疾病模型,AM)的方法是在成熟幼虫停止进食后,用低熔点石蜡封堵家蚕的吐丝孔,阻止其丝腺中储存蛋白质向体外分泌,导致整个蛹期血淋巴蛋白浓度一直维持在极高水平,并出现高致死现象。脂肪体活体形态观察和细胞膜染色,以及组织切片染色结果显示,轻症TBH家蚕脂肪体开始解离较野生型提前,解离和重塑过程延长;重症AM家蚕脂肪体开始解离时间较对照迟,解离过程显著延长,重塑困难。qRT-PCR调查脂肪体重塑相关基因BmAtg6、BmAtg8和BmDronc的表达,发现在两种模型家蚕的变态期脂肪体中,这3个基因的表达水平均显著低于对照组。进一步的细胞溶酶体染色及细胞核DAPI染色实验结果表明,两种高蛋白血症家蚕的脂肪体细胞出现了一定程度的自噬和凋亡障碍。2高蛋白血症影响了变态期家蚕脂肪体生理功能HPLC测定结果显示,高蛋白血症家蚕脂肪体中多种游离氨基酸的含量出现了显著变化,氨基酸转化代谢相关的GPT、GOT酶活性也出现了异常。细胞氧化应激水平调查结果显示,高蛋白血症家蚕脂肪体中ROS增多,催化ROS转化为过氧化氢的SOD活性和分解过氧化氢的CAT活性,以及GST活性都显著升高。变态期脂肪体合成Vg的水平调查结果显示,高蛋白血症家蚕脂肪体中的Vg基因转录水平显著低于对照,暗示雌性生殖发育必需的Vg蛋白合成出现障碍;进一步的卵巢发育观察结果显示,高蛋白血症家蚕的卵巢重量及性腺系数均显著低于对照。TBH家蚕的成虫以及轻症AM家蚕(吐丝6 h后封堵吐丝孔)成虫的产卵数减少,不受精卵增多。
【关键词】：高蛋白血症 疾病模型 脂肪体重塑 生理功能 生殖
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文献综述11-26
• 1 高蛋白血症及其动物模型11-15
• 1.1 高蛋白血症11-12
• 1.2 高蛋白血症动物模型12-15
• 2 家蚕脂肪体及其生理功能15-19
• 2.1 家蚕脂肪体抗氧化应激相关物质15-17
• 2.2 家蚕脂肪体组织内氨基酸转化代谢相关酶类17-18
• 2.3 家蚕脂肪体的卵黄原蛋白合成与转运18-19
• 3 家蚕脂肪体的重塑19-26
• 3.1 家蚕脂肪体组织的解离20-22
• 3.2 家蚕脂肪体细胞的程序性死亡22-25
• 3.3 家蚕脂肪体细胞的分化及组织再生25-26
• 第二章 研究内容与方法26-47
• 1 研究目的和意义26
• 2 研究内容26
• 3 技术路线26-27
• 4 实验材料27-30
• 4.1 实验动物27-28
• 4.2 高蛋白血症家蚕建模处理28-30
• 5 主要试剂及试剂盒30-32
• 6 主要仪器设备32-33
• 7 实验方法33-47
• 7.1 组织切片及其HE染色33-34
• 7.2 新鲜组织压片观察34
• 7.3 细胞膜染色34
• 7.4 溶酶体染色34-35
• 7.5 DAPI染色35
• 7.6 组织总RNA提取35-36
• 7.7 RNA消化36
• 7.8 RNA的反转录36-37
• 7.9 实时定量PCR37-38
• 7.10 脂肪体组织氨基酸的HPLC测定38-40
• 7.11 ROS染色40-41
• 7.12 BCA法测定蛋白浓度41
• 7.13 酶活性测定41-45
• 7.14 蚕卵计数及不受精率统计45-46
• 7.15 性腺成熟系数调查46-47
• 第三章 结果与分析47-71
• 1 高蛋白血症引起脂肪体重塑异常47-55
• 1.1 高蛋白血症突变体家蚕TBH的脂肪体重塑47-50
• 1.2 封堵吐丝孔家蚕的脂肪体重塑50-55
• 2 高蛋白血症家蚕脂肪体重塑异常的分子机制55-61
• 2.1 伴随TBH家蚕脂肪体重塑异常的PCD信号通路调控变化55-58
• 2.2 高蛋白血重症家蚕脂肪体重塑异常的分子机制58-61
• 3 高蛋白血症对家蚕脂肪体游离氨基酸代谢的影响61-65
• 3.1 高蛋白血症对家蚕脂肪体的游离氨基酸含量影响61-63
• 3.2 高蛋白血症对脂肪体中氨基酸转化代谢相关酶活性的影响63-65
• 4 高蛋白血症对脂肪体氧化应激水平的影响65-66
• 5 高蛋白血症通过影响脂肪体的蛋白质合成影响生殖66-71
• 5.1 高蛋白血症影响了雌性家蚕的产卵66-68
• 5.2 高蛋白血症危害了家蚕的卵巢发育68-69
• 5.3 高蛋白血症降低了家蚕脂肪体的Vg基因表达水平69-71
• 第四章 结论与展望71-73
• 1 结论71
• 2 论文创新点71-72
• 3 后续研究展望与建议72-73
• 参考文献73-84
• 附录84-87
• 附录1 文中主要缩略词表84-85
• 附录2 家蚕(Bm)脂肪体中游离氨基酸含量85-87
• 研究生期间参与项目与成果87-89
• 攻读学位期间公开发表论文87
• 攻读学位期间参与申请发明专利87
• 攻读学位期间参与项目87-89
• 致谢89-91

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本文编号：1106452