TL1A活化滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎发病机制中作用的研究

发布时间：2017-11-01 01:07

  本文关键词：TL1A活化滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎发病机制中作用的研究

  更多相关文章： 类风湿关节炎 TL1A 滑膜成纤维细胞 IL-6 肿瘤坏死因子受体

【摘要】：目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生为特点,引起邻近的软骨组织和骨结构进行性破坏的慢性炎症浸润的多发性关节炎。滑膜为软骨供给营养,为关节提供润滑液。滑膜衬里层由滑膜衬里层细胞构成,滑膜衬里层细胞被称为滑膜细胞,由巨噬细胞样和成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)构成。尽管T、B淋巴细胞以及巨噬细胞都参与了RA的发病机制,但滑膜成纤维细胞在该疾病中发挥重要的作用。滑膜衬里中FLS分泌的多种细胞因子能够加剧关节局部炎症反应导致软骨组织受到侵蚀。既往研究表明,肿瘤坏死因子(TNF)与其相应受体结合后能够启动RA中炎症的级联反应,在组织损伤和骨质破坏中发挥了重要作用。肿瘤坏死因子样配体1A(TL1A)属于肿瘤坏死因子超家族成员,有研究发现,TL1A与RA的活动度密切相关。TNF-α和IL-β刺激RA患者FLS能够产生TL1A,TL1A与其受体DR3结合后能够诱导多种炎症因子的生成和释放,从而放大炎症效应。目前,大部分关于TL1A在RA中的体外研究都是以T细胞为靶点。本实验通过对TL1A刺激FLS后产生炎症因子的检测分析以及对TL1A作用于FLS的机制研究,进一步探讨RA中,TL1A在FLS中的作用,为TL1A在该疾病中的功能提供了一定的理论依据。方法:(1)收集RA患者以及健康对照血清,通过ELISA方法检测血清中TL1A的表达;(2)体外培养RA患者FLS,TL1A处理细胞后检测细胞中相关炎症因子m RNA的水平,ELISA检测细胞培养基上清中的炎性因子浓度;(3)TL1A刺激细胞前,用信号通路抑制剂处理细胞,通过对刺激后产生炎性因子表达水平的检测,研究TL1A作用于FLS后所活化的信号通路;(4)流式细胞术检测FLS表面TL1A受体DR3,由于结果阴性,为证明TL1A如何作用于FLS,加入TNF受体拮抗剂处理细胞2小时,随后以TL1A刺激,通过对刺激后所产生的炎性因子表达水平的检测,研究TL1A与FLS作用的机制;(5)TL1A刺激FLS后弃去培养基洗净残留刺激剂,加入健康对照PBMC共培养3天,流式细胞术检测Th17的分群情况;(6)蛋白芯片检测3株经TL1A处理48小时前后FLS培养基上清细胞因子水平,分析研究TL1A刺激FLS后所产生的细胞因子在RA中的用作。结果:(1)ELISA检测RA组与正常对照组血清中TL1A表达水平,RA组TL1A水平显著高于正常对照组(P0.05)。(2)应用RT-PCR和ELISA检测TL1A刺激FLS不同时间点(0,6,24,48 h)FLS产生炎性因子的表达情况。TL1A刺激FLS 6h后提取m RNA,RT-PCR结果显示刺激后IL-6和PGE2表达水平显著升高(P0.05),ELISA检测IL-6表达水平结果显示随着刺激时间的延长,IL-6水平逐渐升高以48h最为显著(P0.05),PGE2的水平并未随时间延长表现明显趋势,TL1A刺激组相较于未处理其水平都显著升高(P0.05)。(3)在分别加入NF-κB、JNK抑制剂组中,TL1A刺激FLS产生IL-6水平相比未加入抑制剂直接刺激组显著降低(P0.05)。TL1A刺激后FLS产生IL-6需通过NF-κB以及JNK的活化。(4)FLS中未能检测到DR3的表达。(5)拮抗TNF受体1、2后加入TL1A刺激,结果显示拮抗TNFR2后IL-6和PGE2水平显著降低(P0.05)。TL1A能够与FLS表面的TNFR2结合发挥作用。(6)PBMC与TL1A刺激后的FLS共培养,PBMC中Th17比例显著上升(P0.05)。(7)TL1A刺激FLS后培养基中大量趋化因子因子及生长因子水平升高。结论:(1)TL1A促进RA FLS产生IL-6通过NF-κB和JNK的激活。(2)TL1A通过与TNFR2结合作用于FLS促进IL-6的分泌。(3)TL1A促进RA FLS产生IL-6进一步上调Th17。
【关键词】：类风湿关节炎 TL1A 滑膜成纤维细胞 IL-6 肿瘤坏死因子受体
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.22
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-23
• 1. 材料14-16
• 1.1 实验仪器14
• 1.2 主要试剂14-15
• 1.3 试验用主要试剂的配制15-16
• 1.4 其他试剂及材料16
• 2. 方法16-22
• 2.1 RA患者外周血血清的提取16
• 2.2 外周血单个核细胞的分离16-17
• 2.3 滑膜成纤维细胞的提取17
• 2.4 细胞培养17-18
• 2.5 细胞处理18-19
• 2.6 RA-PCR检测19-20
• 2.7 ELISA检测培养液中炎性因子水平20-21
• 2.8 流式检测21-22
• 2.9 蛋白芯片分析22
• 3. 统计学分析22-23
• 结果23-32
• 1. RA患者血清中TL1A水平增高23-24
• 2. TL1A刺激RA FLS分泌IL-6 和PGE224-26
• 3. TL1A通过NFκB、JNK信号通路刺激RA FLS促进IL-6分泌26-27
• 4. RA FLS中不表达DR327
• 5. TL1A与TNFR2结合作用于RA FLS促进IL-6 分泌27-28
• 6. TL1A促进RA FLS分泌IL-6 上调PBMC中Th17比例28-29
• 7. 蛋白芯片分析29-32
• 讨论32-36
• 结论36-37
• 参考文献37-43
• 综述43-54
• 参考文献49-54
• 攻读学位期间发表论文情况54-55
• 致谢55-56

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 奚正德,李宁丽,张雁云,张冬青,臧敬五;滑膜成纤维细胞在关节炎发病中的作用[J];自然杂志;2004年04期

2 肖楚吟;潘云峰;郭兴华;蔡道章;;滑膜成纤维细胞的原代培养及生物特性[J];中国医学工程;2010年02期

3 丁娟;王志军;董晓薇;张淑雅;芦晓红;赵薇;;RA滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定[J];现代生物医学进展;2012年36期

4 周振华;徐卫东;吴岳嵩;;滑膜成纤维细胞与类风湿性关节炎相关研究的进展[J];中华关节外科杂志(电子版);2008年06期

5 柏干苹;周丽娜;贺伟峰;罗高兴;陈烯伟;易绍萱;胡晓红;石东文;陈光兴;方勇飞;吴军;;人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析[J];第三军医大学学报;2006年11期

6 柯庆喜;张志伟;赵付前;何玲鸽;陈章权;;肿瘤坏死因子-α对人滑膜成纤维细胞白细胞介素-37表达的影响[J];实用医学杂志;2013年05期

7 柏干苹;周丽娜;贺伟峰;罗高兴;陈烯伟;陈光兴;胡晓红;石东文;方勇飞;吴军;;S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义[J];第四军医大学学报;2008年07期

8 侯亚楠;郭礼和;;滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎中的作用[J];细胞生物学杂志;2009年02期

9 姜林娣;王汉洲;郭津生;赵凤娣;薛如意;王吉耀;;RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成[J];复旦学报(医学版);2007年02期

10 柏干苹;周丽娜;贺伟峰;罗高兴;陈烯伟;陈光兴;胡晓红;石东文;方勇飞;吴军;;类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析[J];第三军医大学学报;2008年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 蔡恒星;李颖杰;龙星;;不同浓度透明质酸对滑膜成纤维细胞粘附和增殖的影响[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 聂英坤;于慧敏;张凤山;;紫草素对RA滑膜成纤维细胞COX-2表达的影响[A];全国第八届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2010年

3 贾俊峰;朱平;;滑膜成纤维细胞骨侵蚀体外培养体系的建立及应用[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年

4 聂英坤;于慧敏;王振宇;;紫草素对RA滑膜成纤维细胞COX-2表达的影响[A];全国第十一届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2013年

5 吴振彪;朱平;卢宁;史战国;樊春梅;王彦宏;;类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞与单核细胞混合培养后基质金属蛋白酶合成能力[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年

6 舒强;李兴福;侯怀水;李栋;刘花香;;艾拉莫德对关节炎滑膜成纤维细胞特性的影响[A];全国自身免疫性疾病专题研讨会暨第十一次全国风湿病学学术年会论文汇编[C];2006年

7 张丽君;李博;谢燕;张春容;何伟珍;徐珊;叶志中;庄俊汉;;IL-1β对滑膜成纤维细胞炎症因子表达的影响[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年

8 李茹;张晓苹;王世瑶;穆荣;栗占国;;miR-146a对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的抑制作用研究[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年

9 赵文君;崔爽爽;邢国胜;于顺禄;;类风湿关节炎滑膜成纤维细胞对T淋巴细胞生物学行为的干预作用[A];第十九届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2012年

10 郑一宁;梅轶芳;李宏颖;魏雪敏;韩玉艳;于惠铭;张志毅;;三氧化二砷调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞促血管生成作用的分子机制[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 张艳君;交叉韧带损伤后滑膜成纤维细胞中赖氨酰氧化酶和基质金属蛋白酶表达的研究[D];重庆大学;2013年

2 姜林娣;RNA干扰抑制COX-2合成以及对类风湿关节炎滑成纤维细胞生物学活性的影响研究[D];复旦大学;2006年

3 王建光;类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的比较蛋白质组学研究[D];第二军医大学;2011年

4 张婷;p53在滑膜成纤维细胞炎症和增生中的作用[D];中国协和医科大学;2008年

5 柏干苹;正常人与关节炎患者血浆、滑膜细胞的差异蛋白质组分析[D];第三军医大学;2006年

6 窦鹏程;四种药物对骨关节炎滑膜成纤维细胞分泌IL-1β、MMP-13、PGE2的影响[D];中南大学;2012年

7 朱宝玉;滑膜成纤维细胞中促炎因子IL-6、VEGF影响骨关节炎病情进展的实验研究[D];中南大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王菁;C反应蛋白在类风湿关节炎发病中的作用机制[D];安徽医科大学;2015年

2 孔静静;TLR4对脂多糖诱导的大鼠颞下颌关节滑膜成纤维细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响[D];山东大学;2015年

3 赵晓峰;三水白虎汤抑制滑膜成纤维细胞迁移的体外研究[D];南方医科大学;2015年

4 蔺娜;脂联素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞迁移及侵袭特性影响的研究[D];南京医科大学;2015年

5 李炳彤;脂联素亚型及浓度对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞促炎作用的影响[D];吉林大学;2016年

6 任丽丽;10-羟基喜树碱对RA滑膜成纤维细胞的抑制作用[D];郑州大学;2016年

7 高皖皎;扁蒴藤素抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及其机制研究[D];南方医科大学;2016年

8 马梓健;TL1A活化滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎发病机制中作用的研究[D];大连医科大学;2016年

9 许永权;骨性关节炎相关基因MCF2L与滑膜成纤维细胞凋亡及炎症反应的关系研究[D];中南大学;2014年

10 陈岩;HMGB1-LPS复合物促进滑膜成纤维细胞向类风湿关节炎滑膜成纤维细胞表型的转变[D];第二军医大学;2013年

，

本文编号：1124552