卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞的建系、鉴定及诱导分化

发布时间：2017-11-23 07:06

  本文关键词：卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞的建系、鉴定及诱导分化

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【摘要】：目的:建立和鉴定卵巢早衰(又称原发性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)患者来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),研究其向原始生殖细胞分化的潜能。方法:将表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4和Lin28基因的p EB-C5和表达SV40 T抗原的p EB-Tg质粒转染POI患者的外周血单个核细胞,将其重编程为i PSCs并检测其干细胞多能性特性。添加转化生长因子β1(transfroming growth factor-β1,TGF-β1)和骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)后,应用real-time PCR和Western blot方法分别检测原始生殖细胞标志物的mRNA及蛋白表达水平。结果:通过碱性磷酸酶染色、细胞免疫荧光、拟胚体及畸胎瘤形成检测,证明了POI患者外周血来源的i PSCs可成功向3胚层细胞分化并保持多能性。添加TGF-β1和BMP4后,诱导组原始生殖细胞特异性标志物干细胞生长因子受体(stem cell growth factor receptor,c-Kit)、发育多能性相关蛋白3(developmental pluripotency-associated 3,STELLA/DPPA3)和DEAD盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,VASA/DDX4)的mRNA水平明显升高(P0.05),VASA/DDX4蛋白表达水平亦明显增加(P0.05)。结论:POI患者外周血单个核细胞在体外可被成功诱导成无外源性基因整合的i PSCs,并且具有多能分化特性,添加TGF-β1和BMP4后可向原始生殖细胞分化。
【作者单位】： 中山大学附属第三医院生殖医学中心;中山大学孙逸仙纪念医院生殖医学中心;广东省中医院生殖科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81170533) 广东省科技计划(No.2013B021800091) 广东省大学生创新计划(No.20132049)
【分类号】：R711.75
【正文快照】： adding TGF-β1 and BMP4.卵巢早衰(premature ovarian failure;又称原发性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)是指育龄女性40岁以前出现卵巢功能减退,表现闭经、高促性腺激素和低雌激素状态[1],是女性不孕的常见原因。其诊断标准为40岁之前出现原发或继发性闭，

本文编号：1217594