大鼠骨髓间充质干细胞向甲状旁腺细胞定向分化的体外研究

发布时间：2017-12-08 17:15

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞向甲状旁腺细胞定向分化的体外研究

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【摘要】：目的:通过用甲状旁腺细胞培养液体外培养骨髓间充质干细胞(BMSCs),促使BMSCs向甲状旁腺细胞定向分化。为BMSCs应用于临床治疗甲状旁腺功能减退症奠定理论依据和实验基础。方法:(1)SD大鼠甲状旁腺细胞的分离、培养选取体重约150g±20g健康雄性SD大鼠,取其甲状旁腺,漂洗、剪碎、消化后,接种于培养瓶中,用RPMI 1640培养液中(含15%FBS)培养。(2)SD大鼠甲状旁腺细胞培养液的制备选取第3代、融合率达80%的SD大鼠甲状旁腺细胞,洗涤后换DMEM-F12培养液(含15%FBS),每天收集细胞培养液。将培养液离心后取上清经0.22um的微孔滤膜过滤,冻存备用。使用前按1:2(v/v)比例与DMEM-F12培养液(含15%FBS)混合。(3)SD大鼠BMSCs的分离、培养及鉴定选取1周龄的健康雄性SD大鼠,无菌下取股骨及胫骨。采用全骨髓贴壁培养筛选法获取SD大鼠BMSCs。取第3代SD大鼠BMSCs,加入CD45、CD90、CD29、CD11b补体抗体,流式细胞仪进行检测,对SD大鼠BMSCs进行鉴定。(4)SD大鼠BMSCs的分化、鉴定用甲状旁腺细胞培养液培养SD大鼠BMSCs,设实验组及阳性对照组。分别于7d、14d、21d和28 d后收集细胞,通过Western Blot、RT-PCR方法检测甲状旁腺细胞表面标志物(PTH、CASR、GCM2)的表达。结果:(1)镜下观察到形态均一的SD大鼠甲状旁腺细胞。(2)能够稳定传代且均一性良好的SD大鼠BMSCs。流式细胞仪检测第3代SD大鼠BMSCs的纯度高达95%以上。(3)SD大鼠甲状旁腺细胞培养液培养的SD大鼠BMSCs,分化为类甲状旁腺细胞,WB及RT-PCR可以检测到甲状旁腺细胞表面标志物的表达,且其表达的量随着培养液培养时间的延长而增高。结论:本实验成功证实,用SD大鼠甲状旁腺细胞培养液培养SD大鼠BMSCs,可以诱导SD大鼠BMSCs向甲状旁腺细胞分化。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R582.2

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本文编号：1267184