稳定表达小鼠PNPLA7的Huh7细胞系的构建

发布时间：2017-12-09 03:29

  本文关键词：稳定表达小鼠PNPLA7的Huh7细胞系的构建

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【摘要】：目的 :构建稳定表达小鼠PNPLA7-Flag蛋白的人类肝癌细胞Huh7细胞系,观察小鼠PNPLA7在Huh7细胞中的过表达以及对Huh7细胞脂质含量的影响。方法:构建p CMV6-PNPLA7-Flag真核表达载体,应用脂质体转染技术将该质粒导入Huh7细胞,随后通过G418筛选稳定表达的细胞系,运用Western blot方法检测PNPLA7蛋白表达;并通过油酸处理及油红染色观察过表达PNPLA7蛋白对Huh7细胞中脂质含量的影响。结果:成功获得2株稳定过表达PNPLA7-Flag的Huh7细胞系;Huh7细胞中过表达PNPLA7蛋白,在油酸处理后细胞内脂滴含量减少。结论:稳定表达小鼠PNPLA7的Huh7细胞系构建成功;小鼠PNPLA7在Huh7细胞中的表达会引起细胞中脂质含量减少,从而为后续研究PNPLA7蛋白在脂代谢通路的功能及机制提供可靠的细胞模型。
【作者单位】： 南京医科大学生物化学与分子生物学系江苏省功能基因组学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31271268,81471079)
【分类号】：R589
【正文快照】： 脂肪组织主要用于储存能量,在全身脂肪稳态中发挥关键作用。研究已经发现,脂肪组织也是重要的内分泌器官,可以分泌多种脂肪因子来调节机体能量代谢平衡,如瘦素、脂联素、抵抗素等[1]。哺乳动物体内存在两种脂肪组织:白色脂肪组织(white adipocyte tissue,WAT)和棕色脂肪组织(b，

本文编号：1268949