miR-27a介导利拉鲁肽抑制H9C2大鼠心肌细胞纤维化作用的研究

发布时间：2017-12-22 11:45

本文关键词：miR-27a介导利拉鲁肽抑制H9C2大鼠心肌细胞纤维化作用的研究　出处：《天津医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:糖尿病患病率逐年增加,据国际糖尿病联合会最新数据显示2015年全世界有4.15亿20-79岁之间的糖尿病患者,而到2040年这一数字将上升到6.42亿。糖尿病是一种全身性疾病,继发于糖尿病的心血管并发症发病率高,其中心肌纤维化是导致糖尿病患者心室重构的重要原因。心肌纤维化目前尚无有效的治疗方法,所以预防及控制其进展尤为重要。利拉鲁肽属于GLP-1受体激动剂,除降糖作用外还有减重、调脂及心血管保护等作用。近期研究显示利拉鲁肽还具有抗纤维化作用,课题组前期研究发现利拉鲁肽具有减轻糖尿病大鼠心肌及肺组织纤维化的作用,在H9C2大鼠心肌细胞中利拉鲁肽可降低Micro RNA27a(mi R-27a)表达。Micro RNAs(mi RNAs)是转录后水平调节基因表达的一类非编码小RNAs,在细胞及生长过程中有重要的调节作用,并与人类和动物的多种疾病有关。近年研究发现mi R-27a在肝、肺等许多器官中具有促纤维化作用,并与心力衰竭及心肌肥大有关。本研究旨在体外观察mi R-27a表达对H9C2大鼠心肌细胞纤维化的影响,高糖状态下心肌细胞mi R-27a表达变化及利拉鲁肽是否通过降低mi R-27a表达抑制H9C2大鼠心肌细胞纤维化,从而为心肌纤维化预防及控制提供新靶点。方法:1.将H9C2大鼠心肌细胞分为6组:对照组,脂质体lipo2000组(lipo2000组),转染mi R-27a mimics低浓度组(mi R-27a mimics低浓度组),转染mi R-27a mimics低浓度阴性对照组(mi R-27a mimics低浓度N.C组),转染mi R-27a mimics高浓度组(mi R-27a mimics高浓度组),转染mi R-27a mimics高浓度阴性对照组(mi R-27a mimics高浓度N.C组),其中低浓度组分别转染mi R-27a mimics及N.C各150 pmol,高浓度组分别转染mi R-27a mimics及N.C各300 pmol,转染后继续培养48小时。2.将H9C2大鼠心肌细胞分为8组:低糖组(LG组),高糖组(HG组),高糖+mi R-27a mimics组(mimics组),高糖+mi R-27a inhibitor组(inhibitor组),高糖+mi R-27a mimics N.C组(mimics N.C组),高糖+mi R-27a inhibitor N.C组(inhibitor N.C组),高糖+lipo2000组(lipo组),高渗组(HO组)。mi R-27a mimics及N.C和mi R-27a inhibitor及N.C转染浓度为300 pmol,转染后继续培养48小时。3.将H9C2大鼠心肌细胞分为6组:对照组,利拉鲁肽组,利拉鲁肽+lipo2000组,利拉鲁肽+mi R-27a mimics组,利拉鲁肽+mi R-27a mimics N.C组,mi R-27a mimics组。其中mi R-27a mimics及N.C转染浓度为300 pmol,利拉鲁肽浓度为1000 nmol/L(1000 n M),含利拉鲁肽组于转染前24小时给予1000 n M利拉鲁肽提前干预,转染后继续培养48小时。收集细胞后用荧光定量PCR检测各组mi R-27a表达水平,细胞免疫荧光染色观察细胞内胶原蛋白I表达情况。用Western Blotting方法检测与心肌纤维化相关因子:过氧化酶活化增值受γ(PPARγ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化。结果:1.荧光定量PCR结果显示mi R-27a mimics低浓度组及高浓度组较对照组mi R-27a表达水平增高,且高浓度组较低浓度组mi R-27a表达水平进一步增高,有统计学差异(p0.05)。对照组与lipo2000组、mi R-27a mimics低浓度N.C组和高浓度N.C组mi R-27a表达水平无差异。2.荧光定量PCR结果示高糖组较低糖组mi R-27a表达水平增高,高糖+mi R-27a mimics组增高更显著(p0.05)。而高糖+mi R-27a inhibitor组较低糖组mi R-27a表达水平降低(p0.05)。高糖组与高糖+lipo2000组,高糖+mi R-27a mimics N.C组,高糖+mi R-27a inhibitor N.C组mi R-27a表达水平无差异,低糖组与高渗组mi R-27a表达水平无差异。3.Western Blotting结果显示,高糖组和高糖+mi R-27a mimics较低糖组PPARγ蛋白表达水平降低,TGF-β1、MMP-9和CTGF蛋白表达水平增高,且高糖+mi R-27a mimics组蛋白表达变化更显著,差异有统计学意义(p0.05)。高糖+mi R-27a inhibitor组较低糖组蛋白表达呈反向变化(p0.05)。高糖组与高糖+lipo2000组,高糖+mi R-27a mimics N.C组,高糖+mi R-27a inhibitor N.C组蛋白表达水平无差异,低糖组与高渗组蛋白表达水平无差异。4.用利拉鲁肽1000 n M提前干预后,利拉鲁肽组、利拉鲁肽+lipo2000组及利拉鲁肽+mi R-27a mimics N.C组mi R-27a表达水平较对照组下降,有统计学差异(p0.05)。利拉鲁肽+mi R-27a mimics组与mi R-27a mimics组mi R-27a表达水平无统计学差异,但较其余四组明显增加(p0.05)。5.细胞免疫荧光染色结果示细胞内胶原蛋白I表达水平与细胞内mi R-27a表达水平一致,随着细胞内mi R-27a表达水平增加,细胞内荧光强度增加。结论:1.mi R-27a可促进心肌细胞纤维化并呈浓度依赖性。2.高糖状态下心肌细胞mi R-27a表达增加,mi R-27a可调节PPARγ、TGF-β1、MMP-9和CTGF蛋白表达促进心肌细胞纤维化。3.利拉鲁肽能降低mi R-27a表达,从而抑制心肌细胞纤维化。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2

【参考文献】

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