Chemerin其受体ChemR23对高糖诱导的肾小球内皮细胞炎症反应的调控作用

发布时间：2018-02-07 09:21

  本文关键词： Chemerin p38 MAPK 肾小球内皮细胞 糖尿病肾病 炎症因子　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)已经成为世界范围内导致终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)最为重要的原因之一。肾小球内皮细胞(glomerular endothelial cell,GEn C)是肾小球滤过屏障必不可少的组成成分,其对于限制蛋白尿的产生,维持正常肾功能均具有重要的意义。研究发现,高糖环境可诱导肾小球内皮细胞发生明显的炎症反应,引起相应的功能障碍。探讨内皮细胞炎症反应的发生原因对DN发病机制的理解及临床治疗具有重要意义。Chemerin是1997年发现的一种脂肪因子,在体内多种细胞均有表达,且与脂质代谢、炎症反应、免疫调节等密切相关。其分泌入血后具有调节全身及局部炎症反应并诱导白细胞趋化的作用。Chem R23是最主要的识别Chemerin的受体。研究证实Chemerin主要通过Chem R23激活细胞内多种信号通路,引起下游炎症因子的转录,造成组织炎性损伤。但目前为止,二者在DN肾小球内皮细胞炎症反应中的作用尚未明确。目的1.观察高糖环境下小鼠肾小球内皮细胞Chemerin、Chem R23及炎症因子TNF-α、IL-6表达变化。2.沉默Chemerin受体Chem R23的表达后应用Chemerin刺激细胞,观察炎症因子TNF-α、IL-6的表达变化。3.沉默Chemerin受体Chem R23的表达后,观察高糖诱导下炎症因子TNF-α、IL-6的表达变化。4.通过抑制p38 MAPK的磷酸化,观察炎症因子TNF-α、IL-6的表达变化。方法以条件永生化小鼠GEnCs为研究对象1.体外培养小鼠GEnCs并分成四组:正常对照组(葡萄糖:5.6mmol/L)、20mmol/L高糖组、40mmol/L高糖组、渗透压对照组(5.6mmol/L葡萄糖+34.4mmol/L甘露醇),不同培养基作用24h后进行检测。Western Blot检测细胞Chemerin、Chem R23、TNF-α、IL-6蛋白的表达水平,ELISA检测细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平,q RT-PCR检测细胞Chemerin、Chem R23、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。2.构建针对Chem R23的慢病毒载体,将慢病毒载体和空载体分别转染入小鼠GEnCs后,给予Chemerin刺激,共分为四组:正常对照组、Chemerin刺激组、Chemerin+空载体组、Chemerin+sh RNA干扰组。培养一定时间后进行检测。Western Blot检测Chem R23蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平,q RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。3.将慢病毒载体和空载体分别转染入高糖下培养的小鼠GEnCs,共分为四组:正常对照组、高糖组、高糖+空载体组、高糖+sh RNA干扰组。培养一定时间后进行检测。ELISA检测细胞培养上清炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平,q RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平。4.体外培养小鼠GEnCs,高糖刺激前加入p38 MAPK抑制剂SB203580,共分为三组:正常对照组、高糖组、高糖+抑制剂组。培养一定时间后,ELISA检测细胞培养上清炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平,q RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果1.高糖环境下小鼠GEnCs中Chemerin、Chem R23及炎症因子IL-6、TNF-α的表达变化。与正常对照相比,高糖组GEnCs中炎症因子IL-6及TNF-α的表达显著升高(P0.05),同时Chemerin表达水平明显升高(P0.05),但Chem R23表达无明显变化(P0.05),渗透压对照组均无改变(P0.05)。2.慢病毒载体干扰Chem R23表达后Chemerin作用下小鼠GEnCs中炎症因子IL-6、TNF-α的表达变化。使用针对Chem R23的sh RNA慢病毒干扰Chem R23表达后应用Chemerin刺激细胞,Chemerin刺激组IL-6及TNF-α表达明显升高(P0.05),与Chemerin+空载体组相比,Chemerin+sh RNA干扰组IL-6及TNF-α水平明显下降(P0.05)。3.慢病毒载体干扰Chem R23表达后高糖诱导下小鼠GEnCs中炎症因子IL-6、TNF-α的表达变化和p38 MAPK信号通路的活化情况。干扰Chem R23表达后,与高糖+空载体组相比,高糖+sh RNA干扰组IL-6及TNF-α水平明显下降(P0.05)。高糖组p38 MAPK磷酸化水平明显升高(P0.05),提示p38 MAPK活化增强。与高糖+空载体组相比,高糖+sh RNA干扰组p-p38MAPK水平显著降低(P0.05)。4.使用p38 MAPK特异性抑制剂SB203580,小鼠GEnCs中的炎症因子IL-6、TNF-α的表达变化。与高糖组相比,高糖+抑制剂组IL-6及TNF-α水平显著降低(P0.05)。结论1.高糖刺激可诱导GEnCs合成Chemerin。2.Chemerin通过结合其受体Chem R23可引起p38 MAPK信号通路的活化,从而诱导炎症因子IL-6及TNF-α等的表达,促进GEnCs的炎症反应。3.干预Chem R23可抑制高糖引起的肾小球内皮细胞的炎症反应。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2;R692.9

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 闫振成,张建国,黄庆愿,朱妙珍;高糖对肾小球内皮细胞与组织型纤溶酶原激活物结合力的影响[J];中华肾脏病杂志;2001年04期

2 赵君;刘海意;杜慧;李宇琪;乔福元;;滋养细胞诱导肾小球内皮细胞损伤的机制及细胞因子干预靶点研究[J];中国优生与遗传杂志;2011年07期

3 廖洪军;程庆;陈香美;;内皮细胞与肾脏[J];国外医学.泌尿系统分册;1993年04期

4 陈香美，于力方，陈中华，段永刚;肾小球内皮细胞培养及产生细胞外基质的实验研究[J];中华医学杂志;1995年01期

5 丁涵露,朱妙珍,罗向东,梁光萍;单核细胞趋化蛋白-1在肾小球内皮细胞中表达的实验研究[J];中华肾脏病杂志;1999年03期

6 徐启河,陈香美,傅博;凝血酶对肾小球内皮细胞和系膜细胞增殖的影响[J];解放军医学杂志;1997年06期

7 陈朝红,刘志红,余晨,吴义超;一种体外研究肾小球内皮细胞通透性的方法[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年05期

8 赵景宏;黄岚;黄云剑;赵晓辉;宋耀明;尹杨光;;造影剂和甘露醇对大鼠肾小球内皮细胞影响的比较研究[J];西部医学;2009年03期

9 陈朝红,刘志红,余晨,吴义超,黎磊石;血管内皮细胞生长因子对肾小球内皮细胞通透性的影响[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年04期

10 李旭艳;沈珊珊;谢院生;金美玲;季佳瑶;万嘉嘉;刘颖;崔少远;李清刚;白雪源;陈香美;;猪肾小球内皮细胞与系膜细胞的发育过程及相互关系[J];中国中西医结合肾病杂志;2013年06期

相关会议论文 前10条

1 邓玉杰;吕鹏飞;杨键;张晓燕;杨颖;宁光;;脂肪因子Chemerin在胆碱蛋氨酸缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎中的作用及机制研究[A];中华医学会糖尿病学分会第十六次全国学术会议论文集[C];2012年

2 张亚;蓝贤勇;朱金龙;徐瑶;刘金彪;雷初朝;张春雷;陈宏;;六个牛品种Chemerin基因的分子特征研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年

3 姜勇;;炎症反应的研究现状与未来[A];中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2010年

4 欧阳文;何慧娟;王意;;围术期炎症反应与术后认知功能障碍(英文)[A];中华医学会第二十次全国麻醉学术年会论文汇编[C];2012年

5 张卫茹;侯凡凡;刘尚喜;郭志坚;周展眉;;晚期糖基化终产物增加动脉粥样硬化部位的炎症反应[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

6 濮红梅;尹忠诚;刘秉成;李胜开;冯锦红;;血液透析患者血清IL-10与炎症反应及营养状况的关系研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

7 陆志伟;黄慧;姜纯国;徐作军;;辅助性T淋巴细胞与特发性肺间质纤维化关系的初步研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

8 俞佳;王仲;;内源性气体信号分子硫化氢与炎症反应[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年

9 姜凤伟;;饮酒对2型糖尿病患者血清chemerin水平的影响[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

10 周晓艳;徐营营;谢兆宏;许继平;毕建忠;;炎症反应与神经系统变性疾病的研究进展[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前3条

1 杨一唯邋记者 王春;我科学家发现调节人体炎症反应新机制[N];科技日报;2007年

2 王蔚;我国科学家发现调节人体炎症反应新机制[N];大众科技报;2007年

3 记者 徐瑞哲;第三者“插足”抑制炎症反应[N];解放日报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 杨珉;血管生成素对肾小球内皮细胞衰老的影响及其机制探讨[D];复旦大学;2010年

2 赵君;子痫前期滋养细胞引起肾小球内皮细胞屏障功能损伤的机制研究[D];华中科技大学;2011年

3 关亚群;脂肪因子内脂素和Chemerin在代谢综合征发病机制中的作用研究[D];新疆医科大学;2011年

4 潘茜;血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球内皮细胞炎性因子MCP-1表达和增殖、凋亡的影响及其AT_1受体拮抗剂替米沙坦作用的研究[D];中国医科大学;2009年

5 段二珍;HMGB1在PRRSV感染中的作用及Glycyrrhizin抗PRRSV活性研究[D];华中农业大学;2014年

6 韦超;GIT2抑制TLR介导的炎症反应[D];北京协和医学院;2013年

7 杨潇;草鱼白细胞介素1β诱导表达的负调控机制及其在炎症反应中的意义[D];电子科技大学;2014年

8 NURULIARIZKI SHINTA;[D];华中农业大学;2016年

9 张宇丝;汉滩病毒感染引起血管内皮细胞炎症因子的产生及诱发炎症反应的机制[D];第四军医大学;2016年

10 吴越;载脂蛋白E及其拟肽COG1410对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤和炎症反应的影响[D];重庆医科大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 伍俊霞;中介素对大鼠肾小球内皮细胞缺氧损伤的保护作用[D];山西医科大学;2016年

2 张锦;高糖环境下血管生成素2在肾小球内皮细胞中的表达及生物学作用[D];华中科技大学;2011年

3 王丽佳;新诊断2型糖尿病颈动脉内中膜厚度与血清脂联素、Chemerin的相关性研究[D];山西医科大学;2015年

4 王俊平;非酒精性脂肪性肝病患者血清Chemerin水平的变化及其意义[D];河北医科大学;2015年

5 殷琪立;紫外线诱导表达的Chemerin对狼疮皮损局部的浆细胞样树突状细胞归巢及活化作用的研究[D];复旦大学;2012年

6 要萌萌;Mdx小鼠骨骼肌中炎症反应和mpeg1的表达[D];河北医科大学;2015年

7 张晓莹;去铁胺对脂多糖诱发的小鼠中枢神经炎症反应与记忆损伤的改善作用[D];中国人民解放军医学院;2015年

8 陈凯;缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏内质网应激及炎症反应的抑制作用[D];安徽医科大学;2015年

9 张凯;MiR-322负调控LPS诱导炎症反应的机制研究[D];华中农业大学;2015年

10 李雪寒;HSPA12B在抑制LPS所致内皮细胞炎症反应中的必要性研究[D];南京医科大学;2015年

，

本文编号：1494040