大鼠脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞向内皮分化的能力比较

发布时间：2018-02-10 03:40

  本文关键词： 脂肪干细胞 骨髓间充质干细胞 内皮分化 内皮细胞 糖尿病足　出处：《南方医科大学学报》2016年09期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的研究脂肪干细胞(ASCs)向内皮分化的能力,并与骨髓间充质干细胞(BMSCs)对比。方法从SD大鼠中分离培养ASCs、BMSCs,选择生长良好的一定代数的细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面标志物;用CCK-8法绘制细胞生长曲线;进行标准内皮诱导3周,用q PCR检测内皮细胞特异性标志物CD31、KDR、v WF m RNA的表达;免疫荧光染色观察表面抗原CD31的表达;用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)检测诱导组细胞的摄取功能;在Matrigel上验证诱导组细胞的成管能力。结果成功分离培养大鼠ASCs和BMSCs,形态上,ASCs与BMSCs类似,均呈长梭形、纺锤状,类成纤维细胞样形态;流式检测结果显示BMSCs与ASCs均高表达间充质干细胞表面标志物CD29(100%与96.9%)、CD90(96.5%与99.2%),低表达造血系细胞表面标志物CD45(3.9%与0.8%),证实所提取的是间充质干细胞;CCK-8增殖实验结果表明,ASCs的增殖速度比BMSCs的增殖速度快(P0.05)。标准内皮诱导后,q PCR显示诱导组BMSCs和ASCs表达CD31、KDR、v WF m RNA水平均高于未诱导组(P0.05);免疫荧光染色显示CD31抗原表达在诱导组的细胞膜表面;荧光显微镜下诱导组细胞摄取Dil-Ac-LDL(未诱导组不摄取);诱导组细胞在Matrigel上均具备成管能力,证实诱导后的细胞为内皮细胞。结论表明BMSCs和ASCs均可诱导向内皮细胞分化,ASCs广泛分化为内皮细胞的时间更短且增殖能力更强,提示ASCs比BMSCs更具有应用前景。
[Abstract]:Objective to study the ability of adipose stem cells (ASCs) to differentiate into endothelial cells and compare them with BMSCs (bone marrow mesenchymal stem cells). The cell growth curve was plotted by CCK-8 method, the expression of CD31kDRV WFM RNA was detected by Q PCR for 3 weeks after induction of standard endothelial cells, and the expression of surface antigen CD31 was observed by immunofluorescence staining. Acetylated low density lipoprotein (Dil) labeled Dil-Ac-LDL was used to detect the uptake function of the cells in the induction group, and to verify the ability of the induced cells to form tube-forming cells on Matrigel. Results ASCs and BMSCs were isolated and cultured successfully. The cells were similar to BMSCs in morphology, both of which were fusiform and spindle-shaped. Fibroblast-like morphology; The results of flow cytometry showed that both BMSCs and ASCs expressed 100% and 96.9% of mesenchymal stem cell surface markers, and 96.5% and 99.2% of mesenchymal stem cell surface markers, respectively, and low expression of CD45% and 0.8% of mesenchymal stem cell surface markers, respectively. The results of proliferation test showed that the extracted mesenchymal stem cells were CCK-8. The expression of BMSCs and ASCs in the induction group was higher than that in the uninduced group (P 0.05), and the expression of CD31 antigen on the surface of the cell membrane was detected by immunofluorescence staining. The induction of Dil-Ac-LDL (no uptake of Dil-Ac-LDL) by fluorescence microscope, the ability of tube-forming on Matrigel was found in all the induced cells. Conclusion both BMSCs and ASCs can induce endothelial cells to differentiate into endothelial cells more widely and have shorter time and stronger proliferative ability, suggesting that ASCs is more promising than BMSCs.
【作者单位】： 南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科;澳门大学健康科学学院;
【基金】：广东省自然科学基金(S2013010016045) 广州市科技计划项目(201508020262)
【分类号】：R587.2

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