KLF14基因表达改变对肝胰岛素抵抗及其相关信号通路的影响
本文关键词： KLF14 mRNA 蛋白 表达 KLF14 hcepa1-6细胞 葡萄糖摄取 PI3K/Akt信号通路 KLF14 hepa1-6细胞 胰岛素抵抗 葡萄糖摄取 Akt 出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：第一部分 KLF14基因mRNA及蛋白在小鼠及人类代谢相关组织中的表达目的：观察KLF14基因mRNA及蛋白在C57BL/6J,HFD-C57BL/6J、 db/db小鼠及正常人、T2DM患者代谢相关组织中的表达情况。方法：提取小鼠肝脏、脂肪、肌肉组织及正常人、T2DM病人脂肪、肌肉组织的RNA和蛋白。RNA经逆转录为cDNA,然后通过实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测KLF14基因mRNA在各组织中的表达情况。采用Western blot检测KLF14蛋白在各组织的表达情况。结果：KLF14 mRNA和蛋白在HFD-C57BL/6J、db/db小鼠肝脏、脂肪、肌肉组织中的表达明显低于C57BL/6J (P0.01);而且在T2DM病人中脂肪和肌肉中KLF14 mRNA和蛋白的表达也明显低于正常人(P0.01)。结论：KLF14 mRNA和蛋白在HFD-C57BL/6J、db/db小鼠及T2DM病人代谢相关组织中表达明显偏低,提示KLF14可能在代谢相关疾病中发挥重要作用。第二部分KLF14基因表达变化对胰岛素信号路中信号分一子的影响目的：探讨KLF14基因过表达对PI3K/Akt信号通路中关键信号分子的影响。方法：采用pIRES2-KLF14质粒转染Hepa1-6细胞建立KLF14过表达模型。利用[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法检测Hepa1-6细胞对葡萄糖的摄取作用;采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中p-InsR/ InsR、p-IRS1/IRS1、p-Akt/Akt、p-GSK3β/GSK3β的蛋白表达水平。结果：在胰岛素(100nM)刺激下,KLF14过表达明显上调细胞葡萄糖摄取率(P0.05), p-InsR、p-IRS1、p-Akt、p-GSK3p的磷酸化水平显著增强(P0.05或P0.01)。给予PI3K抑制剂(LY294002)作用后,细胞葡萄糖摄取率及p-Akt、p-GSK3β的磷酸化水平明显下降(P0.01)。结论：KLF14可能通过激活胰岛素经典通路-—PI3K/Akt信号通路增加胰岛素敏感性,改善肝细胞胰岛素抵抗。第三部分KLF14基因过表达改善肝细胞胰岛素抵抗及其相关机制研究目的：探讨KLF14基因过表达改善肝细胞胰岛素抵抗及其可能的分子机制研究方法：采用一定高浓度胰岛素和(或)葡萄糖作用于Hepa1-6小鼠肝癌细胞,构建肝细胞胰岛素抵抗模型；采用MTT法检测细胞活率；运用KLF14过表达质粒pIRES2-KLF14上调肝细胞KLF14表达；采用[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法检测Hepa1-6细胞对葡萄糖的摄取作用；采用Western blot检测胰岛素信号通路中p-Akt/Akt蛋白表达水平。结果：给予Hepal-6细胞高浓度胰岛素(10-8M)、葡萄糖(25mM)作用24小时,Hepal-6细胞葡萄糖摄取率及p-Akt表达明显下降(P0.01)；然而,在胰岛素(100nM)刺激下,将细胞KLF14基因表达上调可明显改善高浓度胰岛素和(或)高浓度葡萄糖作用引起的葡萄糖摄取率及p-Akt表达下降(P0.05或P0.01),而在给予细胞PI3K抑制剂(LY294002)之后,葡萄糖摄取率及p-Akt水平明显降低(P0.05or P0.01)。另外,采用正常人及T2DM病人血清分别作用Hepa1-6细胞24小时,在胰岛素(100nM)刺激下,T2DM病人血清可使细胞葡萄糖糖摄取率及p-Akt水平明显降低,差别具有统计学意义(P0.05 orP0.01),当pIRES2-KLF14质粒转染细胞后,细胞葡萄糖糖摄取率及p-Akt水平明显得到改善(P0.05),而LY294002则可显著降低KLF14的作用(P0.05 orP0.01)。结论：KLF14基因过表达可能通过活化PI3K/Akt信号通路,增加胰岛素敏感性,从而改善肝细胞胰岛素抵抗。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R58
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，本文编号：1513473
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