牛磺脱氧胆酸通过抑制内质网应激预防糖尿病肝损伤

发布时间：2018-02-24 23:15

本文关键词： 牛磺脱氧胆酸糖尿病肝损伤内质网应激凋亡　出处：《吉林大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:由于生活水平的不断提高以及不良生活习惯的养成等原因,糖尿病的全球发病率及死亡率正在不断升高,已成为威胁健康的主要疾病。随着病情进展,可出现多种并发症,如肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌等糖尿病肝损伤(DLI)已成为糖尿病患者的主要死亡原因之一。由于发病隐蔽且危害严重,DLI日益受到重视。DLI是一个慢性复杂的病理过程,其发病机制与脂代谢异常、胰岛素抵抗、氧化应激、肝糖原贮积等相关。而内质网应激(ERS)介导的凋亡途径是近年来新发现的凋亡途径。糖尿病患者体内高糖、高脂及胰岛素抵抗等状态均可诱导ERS的发生发展。本研究旨在探讨糖尿病对肝脏ERS及肝细胞凋亡的诱导作用,探讨内质网应激抑制剂牛磺脱氧胆酸(TUDCA)对糖尿病诱导的肝脏ERS及凋亡的抑制作用,以期达到预防DLI的目的。方法:选取10周龄FVB小鼠,随机分为对照组(CON),牛磺脱氧胆酸对照组(TUDCA),糖尿病组(DM)及牛磺脱氧胆酸处理的糖尿病组(TUDCA+DM),每组9只。DM组和TUDCA+DM组连续5天腹腔注射STZ(40 mg/kg/d)以诱导1型糖尿病,空腹血糖高于12mmol/L视为糖尿病造模成功。此后TUDCA组和TUDCA+DM组小鼠饮用水中加入TUDCA(500mg/kg/d)。分别在糖尿病发生后2周和2个月处死小鼠并留取肝脏及全血,全血离心后进行生化指标检测,对小鼠肝脏石蜡包埋切片,并进行TUNEL染色、Sirius Red染色、PAS染色。Trizol法提取肝脏组织总RNA,运用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中GRP78、GPR94、ATF6、Caspase 3和CHOP的基因表达。将Hep G2细胞复苏后,细胞融合生长达60%~70%时更换无血清DMEM培养18~24h,TUDCA组和TUDCA+Glu组细胞使用500μg/ml TUDCA预处理12h后,Glu组和TUDCA+Glu组细胞使用50mmol/L Glu培养60h。Trizol法提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR检测细胞中GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase3和CHOP的基因表达。结果:1.TUDCA+DM组小鼠较DM组小鼠状态良好。造模成功2周后,DM组小鼠体重显著低于对照组。造模成功2个月后,TUDCA+DM组和DM组体重均显著低于对照组,DM组小鼠下降最明显。造模成功后2周和2个月,TUDCA+DM组及DM组小鼠血糖均显著高于对照组。相比于DM组,TUDCA+DM组血糖明显下降。2.生化检测结果显示,DM组小鼠血清GSP、ALP、TG、CHO、LDL均高于对照组,TUDCA+DM组小鼠GSP和ALP高于对照组。TUDCA+DM组小鼠各指标均低于DM组。3.HE染色、PAS染色及Sirius Red染色示2周时,DM组小鼠肝脏伴有轻度炎性浸润和少量糖原颗粒蓄积。2个月时,TUDCA+DM组和DM组小鼠肝脏均伴有不同程度的炎性浸润、糖原颗粒蓄积以及纤维增生,其中DM组最为明显。4.TUNEL染色示2周时,TUDCA+DM组和DM组小鼠肝脏凋亡细胞数明显高于对照组,其中DM组凋亡细胞数最高。5.实时荧光定量PCR结果示2周时,DM组小鼠肝脏GRP78、GRP94、ATF6、Caspase 3和CHOP的m RNA表达量均高于对照组,而TUDCA+DM组各标志物表达量均较DM组明显下降。2个月时,DM组GRP78表达量高于对照组,TUDCA+DM组的表达量较DM组明显下降。6.实时荧光定量PCR结果示Glu组细胞GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase 3和CHOP的m RNA表达量均高于对照组,而TUDCA+Glu组各标志物表达量均较DM组明显下降。结论:1.成功建立1型糖尿病小鼠模型,该模型伴有DLI。2.TUDCA能够改善DM小鼠的体重、生化指标及形态学变化。3.ERS介导的肝细胞凋亡是DLI发病机制之一。4.TUDCA通过抑制肝细胞ERS及其介导的凋亡预防DLI。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of diabetes mellitus on liver ERS and apoptosis induced by diabetes mellitus ( DLI ) in diabetic patients with diabetes mellitus ( TUDCA ) and TUDCA + DM group . The results showed that the expression of GRP78 , ATF6 , ATF6 , Caspase 3 and CHOP in DM group were significantly higher than those in control group .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2

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