MAPKs通路在高糖诱导SD乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

发布时间：2016-10-25 18:32

  本文关键词：MAPKs通路在高糖诱导SD乳鼠心肌细胞凋亡中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

《河北医科大学》 2014年

MAPKs通路在高糖诱导SD乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

李娜  

【摘要】：目的： 糖尿病心肌细胞凋亡是糖尿病心肌病最重要的病理变化之一，促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，是一类广泛存在于真核细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶。它是缺血、缺氧、激素作用、生长因子及细胞因子等各种细胞外刺激诱导基因表达、细胞增殖等核反应的共同通路或汇聚点，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。本实验利用原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，研究高糖对心肌细胞凋亡的影响及分子通路机制和MAPK通路阻断剂的抗心肌细胞凋亡作用，旨在探索糖尿病性心肌病药物防治的新靶点。 方法： 1心肌细胞的培养：无菌条件下取新生1-3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取心尖，剪碎成约1mm3大小，应用0.1%的胰酶、0.04%的胶原酶Ⅱ的混合酶消化液分离心肌细胞，10%胎牛血清中和终止消化，应用差速贴壁法获取心肌细胞，置于37℃、5%CO2的培养箱培养，培养基中加入Brdu抑制成纤维细胞生长，每48小时更换培养基。倒置相差显微镜观察心肌细胞形态，0.4%台盼蓝染色检查心肌细胞成活率，免疫细胞化学染色鉴定心肌细胞纯度。 2分组：将培养的乳鼠心肌细胞随机分为7组：对照组，葡萄糖浓度为5.5mmol/L；高糖组，葡萄糖浓度为25mmol/L；高渗对照组:对照组+19.5mmol/L的D-甘露醇；DMSO组：高糖组+1μl/ml的DMSO预处理30分钟； SB203580组：高糖组+P38抑制剂SB203580预处理细胞30分钟； PD98059组:高糖组+ERK抑制剂PD98059预处理细胞30分钟；SP600125组:高糖组+JNK抑制剂SP600125预处理细胞30分钟; 3检测指标：干预72h后，应用流式细胞术分析各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡指标caspase-3蛋白的表达变化及p-JNK，p-P38蛋白表达的变化。 4数据分析：所得数据采用均数±标准差（x±s）表示，统计分析运用SPSS13.0软件。采用单因素方差分析及q检验进行组间的两两比较。以P0.05作为差异有统计学意义。以P0.01作为差异有显著统计学意义。 结果: 1应用混合酶多次消化法，差速贴壁，，成功地培养出纯度较高的心肌细胞，α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学鉴定为阳性。 2流式细胞仪结果：与对照组相比，高渗组凋亡率无明显变化（P＞0.05）;高糖组的细胞凋亡明显增多，有统计学意义（P 0.01）；PD98059组及DMSO组较高糖组细胞凋亡无明显变化（P＞0.05），SP600125组及SB203580组较高糖组细胞凋亡均减少（p0.01）。 3Caspase-3表达结果：与对照组相比，高渗组的caspase-3表达无明显变化（P＞0.05），而高糖组Caspase-3表达增多（P 0.01）；与高糖组相比，PD98059组细胞caspase-3表达无明显变化（P＞0.05），SP600125及SB203580组caspase-3表达均减少（P 0.01）。 4JNK表达结果：与对照组相比，高渗组p-JNK表达无明显变化（P＞0.05），高糖组p-JNK明显表达增多（P 0.01）；SP600125组较高糖组p-JNK表达明显较少（P 0.01）； 5P38表达结果：与对照组相比，高渗组p-P38表达无明显变化（P＞0.05），高糖组p-P38表达明显增多（P0.01），SB203580组p-P38较高糖组表达明显减少（P 0.01）。 结论: 125mmol/L的高糖可能通过激活casepase-3诱导了心肌细胞的凋亡； 2高糖可能通过激活P38及JNK途径，激活caspase-3从而诱导心肌细胞凋亡； 3P38及JNK通路抑制剂在糖尿病心肌病中有抑制心肌细胞凋亡的作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.2;R542.2
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 郝祥俊;王鹏;乔志燕;付文亮;宋成军;陈志宏;;糖尿病肾病ERK信号通路激活机制的研究进展[J];承德医学院学报;2013年02期

2 史日东;于为民;李荣山;吕欣;苑玉聪;;ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年05期

3 林乐迎;李鸿玮;王庆志;张红旗;;糖尿病心肌病心室重塑及心肌细胞凋亡的研究进展[J];四川解剖学杂志;2010年01期

4 黄娅茜;王宪;孔炜;;糖尿病心肌病发病机制的研究进展[J];生理科学进展;2010年01期

5 赵芳;李波;卫银芝;周斌;汪瀚;陈明;干学东;汪朝晖;熊世熙;;MicroRNA-34a Regulates High Glucose-induced Apoptosis in H9c2 Cardiomyocytes[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2013年06期

6 高嵩;危春英;;糖尿病心肌病发病机制及对心功能影响的研究进展[J];医学综述;2011年18期

7 王誉霖;张励才;;p38MAPK信号转导通路与细胞凋亡研究进展[J];慢性病学杂志;2010年12期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨颖婷;王晓梅;;灯盏花素对糖尿病大鼠心肌转化生长因子-β_1和Smad7表达的影响[J];广东医学;2011年20期

2 涂焰明;吴铿;;炎症因子——核因子-κB对糖尿病心肌病的影响[J];国际心血管病杂志;2012年01期

3 吴俊;赵志军;赵改萍;胡玉藏;侯晓东;;二尖瓣环舒张期位移参数评价2型糖尿病左心室舒张功能的临床研究[J];重庆医学;2013年06期

4 楚洪波;李冬梅;石搏;黄可欣;辛暨丽;;大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响及其对心肌的保护作用[J];吉林大学学报(医学版);2013年02期

5 张莉莉;陈景福;华潇潇;靳思思;庄晓东;廖新学;陈培熹;冯鉴强;;硫化氢通过调控瘦素保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤[J];解剖学研究;2013年04期

6 卫银芝;赵芳;熊世熙;干学东;龚斐;曹建雷;汪瀚;周斌;;丹参多酚酸盐对糖尿病心肌病保护作用及可能机制[J];安徽医药;2013年10期

7 勾向博;郭静;王银环;艾凌艳;韩淑英;;荞麦糠皮提取物对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用[J];吉林大学学报(医学版);2013年06期

8 吴菊清;欧阳伟;;心脏微小RNA与心肌肥厚显像[J];广东医学;2013年21期

9 郭馨云;;内脂素的相关研究进展[J];广东医学;2013年22期

10 曾海燕;;莱菔硫烷对阿霉素诱导心肌毒性大鼠的保护作用[J];当代医学;2014年01期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘奇;降糖三黄片对高糖诱导的心肌细胞TGF-β1调控的影响及临床研究[D];广州中医药大学;2012年

2 蔡茜;根皮苷对db/db小鼠糖尿病心肌病变保护机制的定量蛋白质组学研究[D];山东大学;2013年

3 郝盼盼;血管紧张素（1-7）干预和评价糖尿病性心肌病的基础和临床研究[D];山东大学;2013年

4 刘玉胜;DPP—Ⅳ抑制剂对糖尿病大鼠左室心肌重塑与功能的影响及作用机制[D];山东大学;2013年

5 翟昌林;甘草甜素对大鼠心肌缺血再灌注后的保护作用及其机制研究[D];山东大学;2013年

6 范悦琳;降糖三黄片对糖尿病大鼠心肌保护作用及对BRADYKININ β1调控机制的影响[D];广州中医药大学;2013年

7 范佳琳;降糖三黄片对糖尿病心脏病变心肌保护作用及对GLP-1的影响[D];广州中医药大学;2013年

8 杨盛兰;microRNA-30c通过调节自噬参与调控糖尿病心肌病机制的研究[D];华中科技大学;2013年

9 余薇;姜黄素对2型糖尿病心肌病的保护作用及机制研究[D];华中科技大学;2013年

10 刘蜜;西洋参茎叶总皂苷抑制内质网应激相关凋亡改善大鼠急性心肌梗死后心室重构的研究[D];中国中医科学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张忠;血管紧张素抑制剂对2型糖尿病大鼠心脏损伤的影响[D];山西医科大学;2011年

2 张燕;硫氧还蛋白系统在高糖高脂培养的成年大鼠心肌细胞损伤中的作用[D];山西医科大学;2011年

3 刘春巧;急性冠脉综合征患者合并糖代谢异常与心功能的关系[D];河北医科大学;2011年

4 柴李殷;TRB3与糖尿病心肌病的相关性及其机制研究[D];重庆医科大学;2011年

5 吴迦勒;贝那普利对糖尿病大鼠心功能的保护作用[D];浙江大学;2011年

6 赵田田;中药通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化预防作用的实验研究[D];辽宁医学院;2011年

7 王慧慧;应变率技术定量评价不同分期糖尿病肾病患者左心室纵向舒张功能[D];山东大学;2011年

8 喻苏青;山茱萸总苷对糖尿病大鼠心肌病变的保护作用及其机制研究[D];浙江工业大学;2011年

9 李敏;霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾组织IGF-1、MMP-2表达的影响[D];郑州大学;2012年

10 侯敏;Exendin-4对糖尿病大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响[D];山西医科大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 梁自文,张忠辉,张平,陈意生;糖尿病性心肌病大鼠的心肌结构、代谢和功能的变化[J];第三军医大学学报;1996年04期

2 丁桂霞,张爱华,陈荣华;Ras/Raf/ERK信号传导通路在肾脏疾病中作用的研究进展[J];国外医学(儿科学分册);2000年05期

3 吴伟玲;张爱青;殷勤;甘卫华;;ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响[J];南京医科大学学报(自然科学版);2007年10期

4 丛丽;李益明;俞茂华;叶红英;;黄芪多糖对糖尿病心肌病变仓鼠心肌胶原表达的影响[J];中国临床康复;2006年07期

5 蒋彬;钠-钙交换与慢性心力衰竭[J];心血管病学进展;2002年06期

6 段惠军;李英;张涛;刘茂东;史永红;;高糖对大鼠肾小球系膜细胞ERK转导通路的影响[J];中国病理生理杂志;2007年02期

7 王宏宇,胡大一;心脏重构与心力衰竭(上)[J];中国医刊;2004年05期

8 李荣山,孙秀丽,刘晓城;肾缺血/再灌注损伤时P38丝裂原活化蛋白激酶及细胞凋亡的实验研究[J];中华肾脏病杂志;2003年03期

9 罗萍;许钟镐;孙广东;张冬梅;苗里宁;李才;;ERK1/2对高糖刺激肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1和p27~(Kip1)表达的作用[J];中华肾脏病杂志;2006年09期

10 张薇;钟明;唐梦熊;马骁;苗雅;孙慧;张运;;Tribble 3在糖尿病心肌病心肌间质重构时的表达和缬沙坦干预的影响[J];中华心血管病杂志;2006年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 范作文,王均志,黄从新;线粒体与心肌细胞凋亡的研究进展[J];中华心血管病杂志;2002年05期

2 董昌武,高尔鑫;高血压病左室肥厚心肌细胞凋亡及其干预研究[J];安徽医学;2004年01期

3 方礼钦;屈红林;;骨髓间充质干细胞与运动性心肌细胞凋亡[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年01期

4 邢维新;;运动训练与心肌细胞凋亡研究的新进展[J];绵阳师范学院学报;2011年02期

5 郑澜,潘珊珊;心肌细胞凋亡的研究现状与展望[J];中国运动医学杂志;2000年04期

6 陈吉球,梁丽凡,肖军,张月光;心肌细胞凋亡的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年05期

7 张晓敏;缺血再灌注与心肌细胞凋亡的研究进展[J];广东医学;2002年02期

8 杜先华,杨芳炬;中药对心肌细胞凋亡的保护作用[J];中药新药与临床药理;2002年06期

9 吕泽平,李俊峡,贾国良;心脏疾病与心肌细胞凋亡研究进展[J];临床荟萃;2002年04期

10 金莉,王国中;心肌细胞凋亡的研究进展[J];齐齐哈尔医学院学报;2003年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 赵宇光;李薇;;基质细胞衍生因子-1β对高脂诱导心肌细胞凋亡的预防作用及机制[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

2 王筠;刘畅;;内质网应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

3 吕秀秀;王华东;余小慧;;小檗碱抑制去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡的机制研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

4 张峰;梁宏;祁章年;黄增明;张晓春;张恒太;王根良;;γ射线全身照射对小鼠血液和心肌细胞凋亡的影响[A];中国空间科学学会空间生命专业委员会2003年中国空间生命科学与航天医学会议论文摘要集[C];2003年

5 张璐洁;吕进泉;;心梗局部高表达整合素连接激酶抑制心肌细胞凋亡改善心脏收缩功能[A];2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2012年

6 师绿江;尹昭云;洪欣;辛益妹;贺鹏飞;任宏伟;韩行湛;关景芳;;金属硫蛋白对加速度致心肌细胞凋亡的影响[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

7 庞锦江;许荣焜;徐向斌;曹济民;赵三妹;单惠敏;陈晨;;Hexarelin对血管紧张素Ⅱ诱导离体心肌细胞凋亡的抑制作用[A];中国生理学会肥胖的临床与基础暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2003年

8 蒋东;郑世营;葛锦峰;赵军;;缺血预处理减轻在体家兔心肌细胞凋亡[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年

9 董建文;丁海雷;朱海峰;朱卫中;周兆年;;间歇性低氧减少缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞凋亡[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

10 庞锦江;许荣焜;徐向斌;曹济民;赵三妹;单惠敏;陈晨;;Hexarelin对血管紧张素Ⅱ诱导离体心肌细胞凋亡的抑制作用[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 本报记者 慕欣;[N];医药经济报;2010年

2 记者 郑福汉 见习记者 甘青;[N];咸宁日报;2006年

3 记者 王丹;[N];健康报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘祥娟;蛋白激酶D在糖尿病心肌病中的作用及分子机制研究[D];山东大学;2015年

2 廖旭东;压力负荷诱导心肌细胞凋亡的机制[D];中国协和医科大学;2003年

3 赵宇光;基质细胞衍生因子-1β对高脂诱导心肌细胞凋亡的预防作用及机制[D];吉林大学;2011年

4 程何祥;氧自由基、钙离子在心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸、胺碘酮、钾通道开放剂等的影响研究[D];第四军医大学;2001年

5 任亮;甲基苯丙胺诱导大鼠心肌细胞凋亡研究[D];华中科技大学;2010年

6 高友山;急慢性心肌缺血心肌细胞凋亡的机制研究[D];第一军医大学;2000年

7 周小波;缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡的机制研究[D];第三军医大学;2005年

8 马颖艳;缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及NO、缺血预处理、热休克对其不同影响与凋亡相关基因表达的实验研究[D];第四军医大学;2000年

9 张鹏;乙醛脱氢酶2抑制氧化应激导致的心肌细胞凋亡及其分子机制[D];复旦大学;2010年

10 时慧琦;软脂酸致H9c2心肌细胞凋亡的机制研究[D];第二军医大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王古平;新型小分子AF-HF001抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡研究[D];江南大学;2015年

2 葛晨;微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用[D];河北医科大学;2015年

3 马苗苗;β3-AR对心肌细胞凋亡的影响及介导机制研究[D];石河子大学;2015年

4 王伟涛;SP600125对脑死亡大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制研究[D];郑州大学;2015年

5 王娟;二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的实验研究[D];安徽医科大学;2015年

6 郁喆;Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究[D];苏州大学;2015年

7 李闯杰;太原市冬季大气细颗粒物致大鼠心肌细胞凋亡机制研究[D];山西医科大学;2015年

8 李文凯;心肌缺血再灌注损伤模型大鼠经艾塞那肽预处理后心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax的表达[D];山西医科大学;2015年

9 宋海旭;E1A激活基因阻遏子基因调控自噬溶酶体通路改善心肌缺血再灌注损伤的作用研究[D];第四军医大学;2015年

10 赵福平;降钙素基因相关肽对去甲肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制研究[D];山西医科大学;2010年

  本文关键词：MAPKs通路在高糖诱导SD乳鼠心肌细胞凋亡中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：153276