PPARγ激动剂、胰岛素通过上调负性炎性因子TIPE2的表达抑制高糖、Aβ1-40引起的炎性反应及神经细胞调亡

发布时间：2018-03-03 21:03

本文选题：肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2　切入点：细胞凋亡　出处：《山东大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子-2 (tumor necrosis factor-α induced protein 8 like-2,TIPE2)作为近年新发现的负性炎性因子,是维持体内免疫稳态所必需的蛋白之一。同时,TIPE2能通过与caspase-8结合,促进Fas介导的细胞凋亡和T细胞活化诱导的细胞凋亡。高糖环境下,不仅起引起的胰岛素抵抗刺激细胞炎症反应,还可以通过LRP-1介导的Aβ1-40转运机制障碍,影响Aβ1-40的清除。Aβ沉积时,Aβ原纤维可以激活小胶质细胞引起炎症反应和神经毒性因子的释放。但高糖、Aβ对大鼠神经细胞TIPE2的表达及细胞凋亡的影响尚未系统研究。过氧化物酶增殖体激活受体(PPARy)激动剂和胰岛素是临床常用的糖尿病治疗药物,可以通过降低血糖改善高糖引起的炎症反应,本身也可以调节炎症反应,但其对TIPE2和细胞凋亡的影响尚未见诸报道。但本课题拟通过体内、体外实验,观察PPARγ激动剂、胰岛素干预前后高糖环境、Aβ1-40对大鼠神经细胞TIPE2表达和细胞凋亡的影响,探讨TIPE2在糖尿病中枢神经系统损伤中的作用。方法：(1)选取3月龄Wistar大鼠作为空白对照组(3 Wistar组),自发性2型糖尿病大鼠分为3月龄组(3GK组)、6月龄组(6GK组)、罗格列酮干预6月龄组(RSG+6GK组)、胰岛素干预6月龄组(INS+6GK组)。(2) 运用免疫组织化学染色法检测脑组织中TIPE2的表达及空间分布,RT-PCR、 Western Blot法分别测定TIPE2的mRNA、蛋白表达水平,TUNEL染色法检测细胞凋亡。(3)选取24h内新生Wistar大鼠提取大鼠海马原代培养细胞,分为五组,分别采用高糖、罗格列酮、比格列酮、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40干预,每组三个浓度,而后每种物质取中间浓度两两联合干预。(4)运用RT-qPCR、Western Blot法分别测定大鼠海马原代培养细胞中TIPE2的mRNA、蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况。(5)采用GraphPad Prism 5软件进行统计分析,所有数据以万±s表示,多组数据比较采用单因素方差分析,组间差异比较采用两样本f检验,相关性采取Person相关性分析,a=0.05为检验水准。P0.05为差异有统计学意义。结果：(1) TIPE2在脑组织中,分布于活化神经胶质细胞、神经元的胞浆和微血管管壁。比较TIPE2在各组大鼠脑内的表达,3GK组在染色强度、阳染细胞数、阳染血管数、mRNA、蛋白水平均较3 Wistar组有明显增加(P0.05),6GK组均较3GK组有明显增加(P0.05), RSG+6GK组、INS+6GK组均较6GK组有明显减少(P0.05)。(2)3GK组与3 Wistar组相比细胞凋亡数明显增加(P0.05),6GK组与3GK组相比凋亡细胞数明显增加(P0.05)。与6GK组相比,RSG+6GK组和INS+6GK组凋亡细胞数明显减少(P0.05)。(3)通过Person相关性分析,在不同大鼠的脑内,TIPE2与细胞凋亡数呈正相关性(r=0.9816,P0.05)。(4)高糖、罗格列酮、比格列酮、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40单独干预大鼠海马原代培养细胞,TIPE2的表达均明显增加(P0.05),随着浓度的增加,TIPE2的表达增加无统计学差异(P0.05)。(5)高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40两两联合干预时,TIPE2的表达均明显增加较单独干预增加(P0.05),而罗格列酮、比格列酮可抑制高糖、纤丝状AB1-40、寡聚体Aβ1-40引起的TIPE2表达增加(P0.05)。(6)高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40单独干预大鼠海马原代培养细胞,细胞凋亡和死亡数明显增加(P0.05),随着浓度的增加,凋亡和死亡数也增加。罗格列酮、比格列酮单独干预大鼠海马原代培养细胞,细胞凋亡和死亡数变化无明显统计学差异(P0.05)。(7)高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40两两联合干预时,凋亡和死亡数明显增加较单独干预增加(P0.05),而罗格列酮、比格列酮可抑制高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40引起的细胞凋亡和死亡(P0.05)。结论：(1)Ⅱ型糖尿病可促进大鼠脑组织内TIPE2的表达和细胞凋亡,随年龄的增长和糖尿病病程的进展,TIPE2的表达和细胞凋亡数目相应增加,提示TIPE2可能参与调节糖尿病中枢神经系统损伤。(2)胰岛素、PPARγ激动剂干预可减少糖尿病大鼠脑内TIPE2的表达并抑制细胞凋亡,提示胰岛素、PPARγ激动剂作为临床常用糖尿病治疗药物,不仅能够降低血糖,还可以降低高血糖引起的炎症反应、减少细胞凋亡,减轻糖尿病中枢神经系统损伤。(3)Ⅱ型糖尿病大鼠脑组织中TIPE2表达与细胞凋亡呈正相关,提示TIPE2可能通过促进细胞凋亡,参与糖尿病中枢神经系统损伤。(4)高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40单独干预大鼠海马原代培养细胞,均可引起TIPE2表达升高和细胞凋亡,且两两联合干预时TIPE2表达和细胞凋亡进一步提高,提示Ⅱ型糖尿病不仅通过高糖也通过Aβ1-40途径引起炎性反应及糖尿病中枢神经系统损伤。(5) PPARγ激动剂(罗格列酮、吡格列酮)单独干预大鼠海马原代培养细胞,TIPE2的表达明显增加,而细胞凋亡数目无变化,提示正常情况下PPARγ激动剂可以通过提高负性炎症因子的表达起抗炎作用且对细胞凋亡无影响。而在与高糖、纤丝状Aβ1-40、寡聚体Aβ1-40联合干预时,可以降低其引起的TIPE2表达升高和细胞凋亡,提示PPARγ激动剂可以分别抑制高糖、Aβ1-40引起炎性反应及糖尿病中枢神经系统损伤。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

【共引文献】