丁苯酞对STZ糖尿病大鼠认知功能障碍及AMPA受体表达的影响
发布时间：2018-03-10 07:37
本文选题：糖尿病 切入点：认知障碍 出处：《河北医科大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:认知功能障碍是糖尿病最严重的并发症之一,其主要表现为学习、记忆能力的下降。海马的突触可塑性是学习、记忆形成的分子基础,而α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate receptor,AMPAR)是调节突触可塑性的重要因子。AMPAR数量及传导效能的改变可直接影响学习记忆能力。丁苯酞因其神经保护作用已广泛应用于缺血性脑血管病。本实验旨在通过对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)糖尿病大鼠预防性应用丁苯酞,观察其对糖尿病认知功能障碍及AMPAR表达的影响。方法:1制备STZ糖尿病大鼠模型及分组55只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重110g~130g),随机分为正常对照组(NC组,n=10只)和糖尿病组(DM,n=45只)。STZ糖尿病大鼠模型的制备:给予糖尿病大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg,72h后测尾静脉血糖,若血糖≥16.7mmol/L,则纳入STZ糖尿病大鼠组。将造模成功的STZ大鼠随机分为糖尿病对照组(DC,n=15),糖尿病丁苯酞低剂量组(DL,n=15),糖尿病丁苯酞高剂量组(DH,n=15)。2药物干预造模成功后第一天,给予DL组、DH组大鼠溶解于玉米胚芽油的丁苯酞灌胃,剂量分别为DL(60mg/Kg/d)、DH(120mg/Kg/d),NC组及DC组用等量玉米胚芽油灌胃,每日1次,连续12周。3一般情况观察每周检测大鼠的血糖及体重情况。同时记录大鼠精神状态、毛发色泽及饮食、尿量等一般情况。4行为学检测各组大鼠于丁苯酞干预12周后进行Morris水迷宫实验,首先连续5天行定位航行实验,记录逃避潜伏期;再于第6天行空间探索实验,让其自由游泳60s,记录60s内穿越平台的次数。5观察指标水迷宫结束后第1天处死大鼠,取大鼠海马组织,经HE染色观察海马组织形态;行RT-PCR检测AMPAR的m RNA水平;应用免疫组织化学分析、蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测细胞AMPAR的蛋白水平的表达。6统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行统计分析,应用完全随机设计的单因素方差分析、重复测量数据多重比较配对的t检验法(Bonferroni法)及多元方差分析进行统计,结果应用均数±标准差(x±s)表示,P0.05表示差异有统计学意义。结果:1一般情况观察1.1一般状态NC组大鼠精神状态良好、反应灵敏、色泽光亮、进食水及尿量正常,体重稳定增长;DC组、DH组和DL组大鼠则出现精神萎靡、反应迟钝、毛发稀疏枯黄、多尿多饮、体型瘦弱及体重下降等现象。1.2血糖NC组大鼠血糖正常;DC组、DH组和DL组大鼠血糖明显升高(20.0mmol/l)。造模前,NC组与DC组大鼠血糖均正常,差异无统计学意义(7.20±0.54 vs 7.19±0.68,P0.05);大鼠体重差异亦无统计学意义(131.67±4.85 vs 133.05±4.39,P0.05)。造模成功后12W末,与NC组相比,DC组、DH组和DL组大鼠血糖均显著增高,差异有统计学意义(7.42±0.65 vs 31.21,28.67±1.95,29.54±2.69,P0.01);体重则明显降低,差异有统计学意义(345.23±5.57 vs 232.34±12.96,246.14±13.87,244.52±14.40,P0.01)。但DC组、DH组和DL组各组间的血糖及体重相比,差异无统计学意义(P0.05)。2行为学测试结果2.1基础游泳速度为排除大鼠的个体差异,在水迷宫测试前,让其自由游泳60S,了解各组大鼠的基础游泳速度,结果显示各组大鼠基础游泳速度间无统计学差异(P0.05)。2.2定位航行实验2.2.1测试第1天各组大鼠逃避潜伏期未见明显差异(P0.05)。2.2.2测试第2-5天与NC组相比,DL组、DH组及DC组逃避潜伏期延长(P0.05);与DC组相比,DL组、DH组逃避潜伏期缩短(P0.05);与DL组相比,DH组逃避潜伏期缩短(P0.05)。NC组、DH组及DL组不同天数的潜伏期有统计学意义,趋势为:第1天第2天第3天第4天第5天,天数和分组之间不存在交互作用(P0.05)。DC组不同天数的潜伏期差异无统计学意义(P0.05)。2.3空间探索实验四组大鼠间比较,穿越平台次数依次减少:NC组DH组DL组DC组。3 HE染色结果正常对照组大鼠海马CA1区未观察到病理性改变,神经细胞形态结构正常,排列整齐,核大而圆;糖尿病组神经元细胞排列紊乱,数目减少,出现空泡变性,细胞核固缩等。丁苯酞治疗组细胞改变较糖尿病对照组减轻,且丁苯酞高剂量组较丁苯酞低剂量组改变明显。4 Rt-PCR结果四组间比较,海马AMPAR的m RNA表达量依次减少:NC组DH组DL组DC组。5 Western blot结果DC组DH组和DL组的AMPAR蛋白表达量低于NC组(P0.05),且DH组和DL组的AMPAR蛋白表达量与DC组相比均增高(P0.05);其中,DH组的AMPAR蛋白表达量较DL组更加显著(P0.05)。6免疫组化结果DM组海马AMPAR细胞的表达量较NC组降低(P0.05),DH组和DL组的AMPAR细胞的表达量均较DC组增高(P0.05);DH组的AMPAR细胞表达量高于DL组(P0.05)。结论:1 STZ糖尿病大鼠成模12周时出现认知功能障碍,学习记忆能力明显下降;且海马组织中AMPAR表达下降。2应用丁苯酞能改善STZ糖尿病大鼠学习记忆能力,提高海马AMPAR的表达水平,预防糖尿病认知障碍的发生,并且丁苯酞高剂量优于丁苯酞低剂量。
[Abstract]:Objective: cognitive dysfunction is one of the most serious complications of diabetes, the main performance for the study, the decline in memory. The synaptic plasticity in the hippocampus is to study the molecular basis of memory formation, and alpha amino -3- hydroxy -5- methyl isoxazole propionate (-4- - alpha -amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate receptor, AMPAR) is an important regulation of synaptic plasticity. The number of factor.AMPAR and conduction efficiency change can directly affect the ability of learning and memory. Because of the neuroprotective effect of butylphthalide has been widely used in ischemic cerebrovascular disease. This experiment aims to streptozotocin (streptozotocin, STZ) in diabetic rats prophylactic application of butylphthalide, observe its effects on diabetic cognitive dysfunction and expression AMPAR. Method: 1 Preparation of group STZ diabetic rats model and 55 healthy male Sprague-Dawley (SD) rats (weight 110g~130g) were randomly divided. 涓烘甯稿鐓х粍(NC缁，
本文编号：1592366
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