免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导小鼠类风湿性关节炎的作用研究

发布时间：2018-04-05 10:40

  本文选题：免疫调节剂　切入点：葡萄糖-6-磷酸异构酶　出处：《河北大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的用葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)混合多肽片段免疫DBA/1小鼠构建类风湿性关节炎(RA)模型,并进行鉴定。在此基础上,探究含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对RA小鼠的干预作用;对体内iNKT细胞频率与功能的影响以及对Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡的影响;并探讨iNKT细胞对CH2b可能的识别方式和细胞活化信号通路,为今后RA发病机制和治疗方法的探究提供新的理论依据。方法1.构建并鉴定类风湿性关节炎小鼠模型hGPI325-339、hGPI469 483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后,于DBA/1小鼠尾根部多点皮下注射,百日咳毒素0 h、48 h腹腔注射加强免疫进行造模。以健康小鼠和hGPI325-339单一肽段诱导的RA小鼠为对照,观察小鼠体重变化、足踝关节红肿情况;足踝关节苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察炎细胞浸润情况;流式细胞技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测外周血CD4+T细胞和iNKT细胞频率;微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)检测血清细胞因子IL-4、IFN-γ、TNF-α、IL-6的水平变化。2.探究免疫调节剂CH2b干预GPI模型小鼠的作用机制及细胞活化通路应用免疫调节剂CH2b对混合肽段诱导的RA模型小鼠进行干预,以α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)作为阳性对照,观察各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况;关节组织HE染色法观察炎细胞浸润情况的变化;FACS检测全血中iNKT细胞频率变化,Western-Blot检测可能参与的信号通路T-Bet、GATA-3的蛋白表达变化情况。3.检测免疫调节剂CH2b对RA小鼠的Th1/Th2、Th17/Treg免疫平衡紊乱的影响应用免疫调节剂CH2b对混合肽段诱导的RA模型小鼠进行干预,以α-GalCer作为阳性对照,CBA法检测各组小鼠各期血清中细胞因子IL-4、IFN-γ、TNF-α、IL-6的水平变化;PCR法检测各组肝组织中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、ROR-γt mRNA、Foxp3mRNA的表达水平。结果1.混合肽段模型小鼠较健康对照组和单肽片段模型组体重增长缓慢(P0.05);混合肽段诱导的模型小鼠在造模第8天,足趾最先出现红肿,后爪最先受累,逐渐加重累及四肢,在造模第14天红肿达到高峰,足踝肿胀严重,伴行动不利,后逐渐缓解;HE观察发现足踝关节有大量炎细胞浸润,以巨噬细胞与淋巴细胞为主,浆细胞少量出现,且其程度明显强于单肽片段组。外周血CD4+T细胞数量明显增多;炎症高峰期外周血iNKT细胞频率明显下降(P0.05),且血清中TNF-α水平显著升高(P0.05)。2.免疫调节剂CH2b和α-GalCer均可显著改善RA模型小鼠体重增长缓慢、关节肿胀情况(P0.05);足踝关节炎细胞浸润减少;显著升高RA小鼠体内iNKT细胞的频率(P0.05);与健康对照组相比,在造模的第14天,模型组T-bet蛋白表达明显增高(P0.05),而α-GalCer、CH2b组的GATA-3蛋白的表达明显增高(P0.05),而其对T-bet蛋白的表达作用与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。3.模型小鼠经α-GalCer、CH2b干预后,血清中TNF-α、IL-6、IFN-γ水平相比同时期模型组均有降低,在造模第14天降低最明显(P0.05);与模型组相比,GATA-3 mRNA的表达明显增高(P0.05);ROR-γt mRNA的水平在各组之间无明显差异(P0.05);在造模的第14天,模型组T-bet mRNA表达明显增高(P0.05),α-GalCer组、CH2b组Foxp3 mRNA表达增高(P0.05)。结论1.GPI混合肽段诱导的RA模型小鼠在免疫学特征方面,尤其是CD4+T细胞和iNKT细胞免疫病理方面与RA患者尤为接近,可以作为RA免疫机制研究和治疗的良好工具。2.免疫调节剂CH2b通过激活iNKT细胞的GATA-3活化通路改善GPI混合肽段诱导的关节炎状况,今后有可能成为一类极具应用潜能的靶向治疗RA的新工具。3.CH2b通过纠正RA小鼠体内Th1/Th2、Th17/Treg免疫平衡紊乱,维持免疫耐受,发挥免疫调节功能,具有潜在的临床应用价值。
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本文编号：1714417