自身免疫性甲状腺病外周血Treg细胞microRNA表达谱及尿酸的相关分析

发布时间：2016-11-15 16:26

  本文关键词：自身免疫性甲状腺病外周血Treg细胞microRNA表达谱及尿酸的相关分析，由笔耕文化传播整理发布。

《山东大学》 2013年

自身免疫性甲状腺病外周血Treg细胞microRNA表达谱及尿酸的相关分析

张荣荣  

【摘要】：背景：随着人们工作生活节奏加快,和压力的增加,近年来自身免疫性甲状腺疾病(Autoimmune Thyroid Disease, AITD)的发病率正呈逐年上升趋势,Graves病和桥本氏甲状腺炎是两种最常见的自身免疫性甲状腺疾病,其发病机制的研究成为目前关注的焦点。诸多研究报道,CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+T regulatory cells, Tregs)在Graves病(Graves Disease, GD)的发病中起重要作用,在活动期GD病人中存在treg细胞缺陷。MicroRNAs (miRNAs)在treg细胞中广泛表达,并且与免疫调节有关。我们通过对比GD病人和正常人来确定GD病人外周血treg细胞中miRNA的表达谱是否发生改变,希望能够为GD自身免疫异常的发生机制,特别是treg细胞功能异常的机制提供线索,并揭示miRNA在自身免疫调控中的作用和意义。此外,自身免疫调控异常往往会引起一系列细胞功能的异常进而导致糖、脂和核酸等物质代谢紊乱,而这些代谢异常可能会进一步加重自身免疫异常,从而形成恶性循环。AITD中的桥本氏甲状腺炎可出现一过性甲亢,晚期出现甲减,且其导致的自身免疫性甲减在所有导致甲减的病因中占有相当大的比例。另有研究显示甲状腺功能异常与嘌呤核苷酸代谢有明显的相关性,甲亢及甲减患者均存在高尿酸血症,但甲减患者中高尿酸血症及痛风的发病率增加更明显。这些都表明AITD可能在嘌呤核苷酸代谢紊乱的发生发展中发挥着重要作用。为此我们又进一步观察了甲减患者临床血尿酸水平并对相关因素进行分析,初步探讨了甲减与嘌呤核苷酸代谢之间的关系。 方法：研究一：选择15例未经治疗的GD初发患者(GD组)和10例正常对照(NC组),详细记录一般情况、病史以及实验室检查结果。GD组随机分为3个亚组(GD1、GD2、GD3),每组5人,女：男=4：1；NC组也随机分为3个亚组(NC1、NC2、NC3),其中NC2组4人,其余两组3人,NC1、NC2组各一个男性,NC3组无男性。从各组中抽取外周静脉血,应用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCS)再应用免疫磁珠法分选treg细胞,流式细胞仪验证分选细胞的纯度。提取每个亚组患者treg细胞的RNA。为了平衡个体差异因素对结果的影响,降低结果误差,将同一亚组内提取的RNA混合作为一个样品池,进行低密度TaqMan miRNA芯片表达谱分析。GD或NC组中的三个亚组分别作为三个生物学重复,便于应用统计学方法分析芯片结果。六个亚组,六个样品池,共有六张芯片,之后再应用统计学方法分析六个亚组芯片结果,对比GD组和正常对照组芯片结果,找出差异表达的miRNA,并探讨其与自身免疫及GD的关系。 研究二：测定36例原发性甲减患者的甲状腺功能(FT3、FT4和TSH)、甲状腺自身抗体(Anti-TG、Anti-TPO和TRAb)、血尿酸(UA)、血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素(Cys)、β2微球蛋白(P2-MG)以及24小时尿尿酸定量(24hUA),与20例健康对照组进行比较,且对相关因素进行单因素分析。甲减患者根据Anti-TG、Anti-TPO和TRAb存在与否分为自身免疫性甲减(27例)和非自身免疫性甲减(9例)两个亚组,并行亚组间比较。 结果：研究一：1.各组年龄无明显统计学差异；2.GD组FT3、FT4、TRAb明显高于,TSH明显低于正常对照组,差异有统计学意义,两组TGAb(?)(?)TPOAb差异无统计学意义。以上指标在GD1、GD2、GD3三组内无统计学差异,在NC1、NC2、NC3三组内也无统计学差异,各组内生物学重复性好；3.流式细胞仪验证细胞纯度为88.96%；4.低密度TaqMan miRNA芯片结果分析：与正常对照组相比,GD组存在多个表达差异显著的miRNA,其中表达水平明显上调2倍以上者为：has-miR-106b、has-miR-155(?)(?)has-miR-181a,明显下调2倍以上者为：has-miR-16和has-miR-146a。很多研究已经表明这些niRNA均与treg细胞功能、自身免疫调控异常以及GD等自身免疫疾病的发生发展关系密切； 研究二：与健康对照组比较,甲减组TSH、TC、TG、LDL-C、UA、Hcy、Cys和β2-MG明显高于对照组,而FT3、FT4、HDL-C和24hUA显著低于对照组,P均0.05；单因素相关分析显示,甲减患者UA水平与TSH、TC、TG及Hcy呈显著正相关,与FT3、FT4、HDL呈显著负相关；两亚组之间甲状腺功能及抗体、TC、LDL-C、UA(?)(?)24hUA也有显著性差异。 结论：1.本研究首次发现GD患者外周血调节性T细胞内microRNAs表达谱存在差异表达,推测这些差异表达的rnicroRNAs,通过影响treg细胞正常发挥其免疫调控功能,从而导致GD的发生。 2.本研究运用低密度TaqMan miRNA芯片技术对GD患者外周血treg细胞相关miRNA进行了初步筛查,这在国内外尚属首次,为将来进一步深入研究GD发生发展的机制奠定了重要基础,并提供了有价值的线索。研究结果发现has-miR-106b、has-miR-155、has-miR-181a、has-miR-16和has-miR-146a在GD患者外周血treg细胞中存在差异表达,查看既往文献,has-miR-155、has-miR-146a(?)(?)has-miR-106b都已被证实与treg细胞功能调控有关,并在多种自身免疫性疾病中发生差异表达。而has-miR-181a和has-miR-16是新发现的与treg细胞相关的miRNA,这为后续研究提供了重要思路。 3.甲减患者更容易出现高尿酸血症,单因素相关分析显示甲减患者UA水平与TSH、TC、TG及Hcy呈显著正相关,与FT3、FT4、HDL呈显著负相关,证明甲减患者出现血尿酸增高与甲状腺激素减少、脂代谢紊乱、高同型半胱氨酸有关。自身免疫性甲减比非自身免疫性甲减血尿酸水平更高提示自身免疫异常也在高尿酸血症的发生中也发挥着重要作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R581.9
【目录】：

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