2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞功能的研究

  本文关键词：2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞功能的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南京大学》 2013年

2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞功能的研究

刘恿铂  

【摘要】：目的 本研究通过观察2型糖尿病动物个体来源的脂肪干细胞(ADSCs)与正常个体来源脂肪干细胞在体外培养时生长曲线及增殖速率的差异,并通过将两组不同来源的脂肪干细胞诱导分化成脂肪细胞后,ELISA(酶联接免疫吸附剂测定)试验检测两组所分泌的瘦素、脂联素、肿瘤坏死因子-α三种脂肪细胞因子的分泌量的异同,以研究糖尿病个体脂肪干细胞与正常个体来源的脂肪干细胞是否存在差异。 方法 1.将40只6周龄雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只,实验组通过腹腔注射STZ(链脲佐菌素)及给与高糖高脂饲料喂养4周,建立2型糖尿病大鼠模型,对照组仅予常规饲喂。 2.将实验组和对照组大鼠腹股沟脂肪垫及付睾脂肪垫脂肪取出后,分别提取脂肪干细胞,并于相同环境和方法下培养,传代至P3代时,并通过成骨、成软骨及成脂分化及细胞表型鉴定以确定其为脂肪干细胞。并通过测定两组脂肪干细胞细胞生长曲线,分析两组之间细胞活性的差异。 3.将两组脂肪干细胞于p3代时更换成脂分化诱导培养基培养14日成为脂肪细胞。提取每个样本培养皿中上清液并通过ELISA检测其中的脂肪细胞因子瘦素、脂联素和肿瘤坏死因子α三种脂肪细胞因子的量,并比较实验组和对照组间各种脂肪细胞因子表达量的差异,将所收集数据通过单因素方差分析方法处理。 结果 1.通过鼠腹股沟及附睾脂肪垫脂肪经Ⅰ型胶原酶消化,DMEM高糖培养基培养的方法能培养出细胞性质及活性较佳的脂肪干细胞。通过将所获得脂肪干细胞进行细胞表型分析,以及成骨,成软骨,成脂分化后染色观察验证其多能性,证明该法所获细胞为脂肪干细胞,并具有较强的细胞活性和多形性。 2.提取ADSCs培养时,实验组及对照组脂肪干细胞细胞生长曲线均称倒S型,实验组脂肪干细胞达到平台期时间(d10)较对照组(d8)晚,实验组细胞增殖速率(13.1±0.82%)与对照组(14.5±0.89%)之间无统计学差异(P＞0.05)。 3.在光镜下观察发现2型糖尿病组大鼠脂肪干细胞成脂分化后细胞成脂比率明显低于对照组大鼠脂肪干细胞细胞成脂比率。脂肪细胞因子检测瘦素实验组(637.25±102.03pg/ml)及对照组(122.41±81.27pg/ml)之间有显著差异(P＞0.05),实验组及脂联素(42.3±10.5ng/ml)与对照组(637.2±102.0pg/ml)脂联素量有统计学差异(P＜0.05)。实验组及对照组肿瘤坏死因子α浓度无统计学差异(P＜0.05),分别为(1763.7±249.4.Opg)及(1820.4±316.1pg/ml) 结论 1.2型糖尿病大鼠来源的脂肪干细胞与正正常来源脂肪干细胞比较不存在增殖速率上的差异,但进入平台期时间明显较正常个体来源细胞稍晚。 2.2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞分化成脂肪细胞培养基内所分泌瘦素及脂联索较正常个体来源的明显增多,肿瘤坏死因子α分泌量无差异。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R587.1
【目录】：

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