NLRP3炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用及机制的初步探讨

发布时间：2018-06-30 03:06

本文选题：核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 + 炎性体　；参考：《第三军医大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerosis heart disease)是指由于冠状动脉粥样硬化使管腔狭窄、痉挛或阻塞,导致心肌缺血、缺氧或坏死而引起的心脏病,统称为冠状动脉性心脏病(coronary heart disease,CHD)或冠状动脉病(coronary artery disease),简称为冠心病。它是动脉粥样硬化导致器官病变最常见的类型,由于冠状动脉的完全阻塞常为血栓形成所致,近年又被称为冠状动脉粥样硬化血栓性心脏病(coronary atherothrombotic heart disease)。本病多发生于40岁以上的中老年人,男性多于女性,且以脑力劳动者居多,是发达国家的流行病,已成为欧美国家最多见的心脏病病种。2006年WHO公布的数据显示全球每年冠心病死亡720万人,随着世界人口老龄化,全球冠心病的死亡人数仍将持续上升,预计到2020年全世界每年冠心病的死亡人数将上升至1100万人。研究表明,2型糖尿病(type 2 diabetes mellius,T2DM)已成为冠心病的等危症,其心血管并发症是2型糖尿病患者死亡的主要原因,而在冠心病患者中,2型糖尿病并发的冠心病占有相当大的比例。既往大量研究表明,冠心病与2型糖尿病均是集合代谢紊乱与免疫异常的慢性炎症性疾病,而近期研究显示,炎性体在各种慢性炎症性疾病的发生、发展过程中起着重要作用,其中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体可能与2型糖尿病并发冠心病密切相关。综上所述,本项研究通过采集不同病例外周血单个核细胞及血浆,比较其外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA转录及蛋白表达情况,以及血浆中IL-1β、IL-18的含量,以探讨NLRP3炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用及可能的机制。方法:1.病例采集及分组:选取2016年3月至8月期间入住我院心血管内科的患者共110例,分为正常对照组(30例)、单纯冠心病组(30例)、单纯2型糖尿病组(20例)及2型糖尿病并发冠心病组(30例),同时,采集各组患者一般临床资料及生化检验资料。2.分离外周血单个核细胞与血浆:抽取各组患者新鲜EDTA抗凝全血各20ml,运用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离各组患者外周血单个核细胞,普通高速离心法分离各组患者血浆。3.检测外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA转录水平:运用RT-qPCR法分别检测各组患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA转录情况。4.检测外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平:运用Western blot法分别检测各组患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达情况。5.检测血浆中IL-1β、IL-18含量:运用ELISA法分别检测各组患者血浆中IL-1β、IL-18含量。6.比较上述各项实验室指标的差异,并对其进行相关性分析,以明确NLRP3炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用并初步探讨其机制。结果:1.临床生化资料结果:各组患者在性别、年龄、BMI、吸烟史上差异无统计学意义(P0.05),同时,测得各组患者血清总胆固醇、甘油三酯、超敏C反应蛋白、尿酸值差异无统计学意义(P0.05)。2.RT-qPCR检测结果:单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA转录水平均较正常对照组显著增高(P0.05),而单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组组间的差异无统计学意义(P0.05)。3.Western blot检测结果:单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平均较正常对照组显著增高(P0.05),其中,NLRP3蛋白在2型糖尿病并发冠心病组患者外周血单个核细胞中的表达显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P0.05),而ASC、Caspase-1蛋白在单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组组间的差异无统计学意义(P0.05)。4.ELISA检测结果:1)测得IL-1β在单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组、2型糖尿病并发冠心病组患者血浆中的含量分别为(23.35±0.81)ng/L、(22.86±1.67)ng/L、(26.78±1.97)ng/L,均较正常对照组(12.53±2.79)ng/L显著升高(P0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组患者血浆中IL-1β含量显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P0.05)。2)测得IL-18在单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组、2型糖尿病并发冠心病组患者血浆中的含量分别为(100.00±12.90)ng/L、(116.21±11.77)ng/L、(138.49±16.36)ng/L,均较正常对照组(50.04±10.20)ng/L显著升高(P0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组患者血浆中IL-18含量显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P0.05)。5.相关性分析结果:1)各组患者血浆中IL-1β含量与外周血单个核细胞中NLRP3 mRNA(r=0.278,p=0.002)、ASC mRNA(r=0.461,p=0.000)、Caspase-1 mRNA(r=0.262,p=0.004)及NLRP3蛋白(r=0.591,p=0.000)、ASC蛋白(r=0.354,p=0.001)、Caspase-1蛋白(r=0.450,p=0.000)均呈正相关。2)各组患者血浆中IL-18含量与外周血单个核细胞中ASC mRNA(r=0.386,p=0.000)、Caspase-1 mRNA(r=0.295,p=0.001)及NLRP3蛋白(r=0.581,p=0.000)、ASC蛋白(r=0.404,p=0.000)、Caspase-1蛋白(r=0.442,p=0.000)呈正相关,与NLRP3 mRNA相关系数为0.168,无统计学意义(P0.05)。结论:1.NLRP3炎性体的异常激活可能参与了2型糖尿病并发冠心病的病理过程,而且,NLRP3炎性体主要是以NLRP3炎性体-促炎细胞因子(IL-1β)轴的形式发挥作用的。2.NLRP3蛋白在2型糖尿病并发冠心病患者外周血单个核细胞中的表达显著增高,而NLRP3蛋白作为NLRP3炎性体激活的限速元件,在NLRP3炎性体激活的过程中起着关键作用。因此,机体NLRP3蛋白水平的异常增高可能是NLRP3炎性体激活引发疾病的关键。
[Abstract]:Background : Coronary atherosclerosis is the most common type of coronary heart disease ( CHD ) or coronary artery disease , which is commonly referred to as coronary heart disease ( CHD ) or coronary artery disease . It is the most common type of coronary heart disease ( CHD ) or coronary artery disease . In 2006 , the number of patients with type 2 diabetes mellitus ( T2DM ) has been a major cause of coronary heart disease , and the number of patients with type 2 diabetes mellitus ( CHD ) has been increased to 11 million by 2020 . The results show that the number of patients with type 2 diabetes mellitus is the main cause of coronary heart disease . The levels of NLRP3 , ASC and Caspase - 1 in peripheral blood mononuclear cells of patients with type 2 diabetes mellitus were significantly higher than those in normal controls ( P0.05 ) . The levels of IL - 18 in plasma of patients with type 2 diabetes mellitus complicated with coronary heart disease were significantly higher than those in normal control group ( P 0.05 ) . The levels of IL - 18 in plasma of patients with type 2 diabetes mellitus complicated with coronary heart disease were significantly higher than those in normal control group ( P0.05 ) . Conclusion : 1 . The abnormal activation of NLRP3 inflammatory body may be involved in the pathological process of type 2 diabetes complicated with coronary heart disease . The NLRP3 protein plays a key role in the activation of NLRP3 inflammatory body .
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.1;R541.4

【相似文献】