新复合杂合突变致17α-羟化酶缺陷症1例家系研究

发布时间：2018-07-03 08:54

  本文选题：17α-羟化酶/17 + 20-裂链酶陷症　； 参考：《郑州大学》2015年硕士论文

【摘要】：背景:17α-羟化酶/17,20-裂链酶缺陷症是先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)的一种罕见类型,其由于CYP17A1基因突变导致P450c17酶功能缺陷,从而产生高血压、低血钾、男性假两性畸形或女性性幼稚等临床症状。人类CYP17A1基因位于第10号染色体长臂(10q24.3),它共有8个外显子,编码508个氨基酸。目前人类基因突变数据库中(http://www.hgmd.org/)已发现90余种不同的CYP17A1的基因突变类型。国内外对17α-羟化酶缺陷症的研究主要集中在两方面:1.通过对CYP17A1基因进行基因测序,在确定基因突变位点后,通过构建含有突变位点的重组体,从细胞水平鉴定基因突变位点对P450c17酶蛋白功能的影响;2.利用各种生物信息学软件以及信息资料库构建P450C17的计算机三维结构模型,从而预测分析基因突变位点对蛋白的空间结构及功能的影响。目的:该研究的目的是研究我院收治的一例17α-羟化酶/17,20-裂链酶缺陷症患者的CYP17A1基因突变类型。对象及方法:1.先证者:15岁,社会性别为女性,基因型46,XY,郑州大学第一附属医院于2013年收住院,患者表现为原发性高血压、假两性畸形和外阴女性幼稚型。患者血ACTH水平升高,但血、尿皮质醇水平明显降低;性激素六项显示血FSH、LH水平升高,而雄激素、雌激素水平均明显降低;且硫酸脱氢表雄酮、17α-羟孕酮水平亦明显降低。在患者及其家属知情同意下,同时抽取患者及其父母、祖父母、外祖父母外周血各2ml。2.用苯酚-氯仿-异戊醇抽提法提取患者及其家属全血基因组DNA。3.聚合酶链式反应(PCR)扩增及PCR产物纯化和DNA测序:设计分别包含外显子1、外显子2和外显子3、外显子4、外显子5、外显子5、外显子6、外显子7、外显子8的7对引物,用ABI Verity 96well PCR扩增仪分别扩增8个外显子及外显子和内含子连接区,并采用Syngene Gene Genius凝胶成像仪进行琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的纯度,用PCR产物纯化回收试剂盒(SK1141生工生物工程(上海)股份有限公司)进行PCR产物回收,回收后产物用ABI3730XL测序仪进行双向测序。一旦发现突变的存在,该基因组DNA的PCR片段将会被放大100倍并同时进行分析以排除基因多态性。4.测序结果分析:测序结果与标准序列进行对比(Gene Bank ID:1586)。结果:1.同义突变:①第1外显子第46位密码子存在碱基替换(CAC→CAT,H46H)②第1外显子第65位密码子存在碱基替换(TCG→TCT,S65S)。2.无义突变:患者第1外显子非编码区存在碱基替换(T→C)。3.错义突变:第4外显子第236位密码子存在碱基替换(GTT→GAT),导致氨基酸V236D,该突变来自于先证者母亲,其外祖父同样存在该突变,而其父亲、祖父母及外祖母为正常序列。4.碱基缺失及移码突变:第6外显子第329位密码子发生碱基缺失移码突变(TAC→AA),并提前终止(418TGA)。该突变来源于先证者父亲,其祖父同样存在该突变,而先证者母亲、祖母及外祖父母为正常序列。结论:通过对先证者及其父母、祖父母、外祖父母基因分析,发现1个错义突变(V236D)和一个碱基缺失移码突变(Y329K,418X),均为杂合突变。其中Y329K,418X属于中国人群常见的突变类型之一。V236D尚未见有文献报道。通过这两种杂合突变,共同导致P450c17酶发生功能该百年,从而造成患者表现型的改变。
[Abstract]:Background : 17伪 - hydroxylase / 17,20 - lyase deficiency is a rare type of congenital adrenal hyperplasia ( CAH ) . Results : 1 . synonymous mutation : 鈶，

本文编号：2093087