α-硫辛酸对糖尿病大鼠肠道痛觉敏感性的影响及其分子机制的研究

发布时间：2018-09-13 08:32

【摘要】：目的1.初步阐明链脲佐菌素(STZ)诱导的成年糖尿病大鼠肠道痛觉敏感性改变及脊髓DRG神经元(DRG)细胞中P2X3受体表达的变化特征。2.探讨α-硫辛酸(ALA)对糖尿病大鼠肠道痛觉敏感性的作用及其对P2X3受体表达的作用特征。方法1.实验动物选择成年雌性SD大鼠,应用STZ 65mg/kg腹腔注射诱导糖尿病模型。分组:将SD大鼠随机分为对照组(CON),糖尿病组(STZ),糖尿病生理盐水处理组(STZ+NS)及糖尿病α-硫辛酸处理组(STZ+ALA)。运用腹壁撤退反射(AWR)评分检测大鼠在不同的结直肠充气压力下疼痛反应。2.应用Di I(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate)荧光染料直结肠注射逆行标记直结肠投射的脊髓DRG神经元细胞后,利用细胞膜片钳技术,检测DRG神经元兴奋性及ATP电流密度。3.使用Western Blotting技术检测糖尿病大鼠直结肠特异性DRG神经元细胞中P2X3受体表达量的改变。结果1.STZ腹腔注射后1周起,大鼠血糖显著升高,并伴体重不增(p0.01)。2.STZ注射后2-8周,糖尿病大鼠出现肠道痛敏(p0.05),腹腔注射抗氧化剂ALA能明显缓解糖尿病大鼠肠道痛敏。3.糖尿病大鼠直结肠特异性DRG神经元细胞兴奋性及ATP电流密度显著增加,给予腹腔注射ALA一周后,神经元兴奋性明显及ATP电流密度下降。4.糖尿病大鼠直结肠特异性DRG神经元细胞中P2X3受体表达量显著高于对照组(p0.01),而给予ALA腹腔注射一周后,P2X3受体蛋白表达显著下调(p0.01)。结论STZ诱导的糖尿病大鼠肠道特异性DRG节神经元细胞中P2X3受体的表达量显著上调,细胞兴奋性增加,介导了糖尿病大鼠肠道痛觉过敏。抗氧化剂α-硫辛酸能从分子水平阻断上述病理过程,表明氧化应激机制参与调控肠道特异性DRG神经元细胞中P2X3受体的表达及功能。
[Abstract]:Objective 1. To elucidate the changes of intestinal pain sensitivity induced by streptozotocin (STZ) and the expression of P2X3 receptor in (DRG) cells of spinal cord DRG neurons in adult diabetic rats. To investigate the effect of 伪 -lipoic acid (ALA) on intestinal pain sensitivity and expression of P2X3 receptor in diabetic rats. Method 1. Adult female SD rats were selected as experimental animals. Diabetic model was induced by intraperitoneal injection of STZ 65mg/kg. Group: SD rats were randomly divided into control group, (CON), diabetes group, (STZ), diabetic saline group, (STZ NS) group and diabetic 伪 -lipoic acid treated group (STZ ALA). Abdominal withdrawal reflex (AWR) score was used to measure the pain response of rats under different inflatable pressure of colon and rectum. After retrograde labeled spinal cord DRG neuron cells were injected with Di I (_ (1) ~ (-1) -dioctadecyl-3 (3) -tetramethylindocarbocyanine perchlorate, the excitability of DRG neurons and the density of ATP current 路3 were measured by using cell patch clamp technique. Western Blotting technique was used to detect the expression of P2X3 receptor in colon specific DRG neurons of diabetic rats. Results from the first week after intraperitoneal injection of 1.STZ, the blood glucose of the rats increased significantly, and with no weight gain (p0.01). 2. After injection of STZ, the diabetic rats developed intestinal hyperalgesia (p0.05). The abdominal injection of antioxidant ALA significantly alleviated the intestinal pain sensitivity of diabetic rats. The excitability and ATP current density of DRG neurons were significantly increased in diabetic rats. One week after intraperitoneal injection of ALA, the neuronal excitability was obvious and the ATP current density decreased by .4. The expression of P2X3 receptor in DRG neurons of diabetic rats was significantly higher than that in the control group (p0.01), but the expression of P2X3 receptor protein was down-regulated one week after intraperitoneal injection of ALA (p0.01). Conclusion the expression of P2X3 receptor in the intestinal specific DRG ganglion neurons of diabetic rats induced by STZ was significantly up-regulated and the cell excitability was increased, which mediated the intestinal hyperalgesia in diabetic rats. The antioxidant 伪 -lipoic acid can block these pathological processes at molecular level, suggesting that oxidative stress mechanism is involved in regulating the expression and function of P2X3 receptor in intestinal specific DRG neurons.
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

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本文编号：2240617