Nurr1在2型糖尿病发病中的作用

发布时间：2018-10-13 13:15

【摘要】：第一部分：2型糖尿病合并冠心病患者血清炎症指标水平的变化及临床意义目的：观察2型糖尿病合并冠心病患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、脂联素(APN)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的变化,并探讨其在糖尿病动脉粥样硬化病变中的部分作用机制。方法：纳入研究对象共324例,分为四组,其中A组(单纯2型糖尿病)50例；B组(单纯冠心病)64例；C组(糖尿病合并冠心病)90例；对照组(健康体检者)120例。收集一般临床资料,检测空腹血糖,糖化血红蛋白、血脂等生化指标,应用ELISA法对TNF-α、hs-CRP、APN和]HMGB1水平进行检测。结果：A、B和C组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)水平均高于对照组(P0.05或P0.01),C组(糖尿病合并冠心病组)血清TG和LDLC水平均高于A组(单纯糖尿病组)(P0.05)；四组间HDLC水平比较无显著性差异(均P0.05)。A组(单纯糖尿病组)和C组(糖尿病合并冠心病组)患者空腹血糖、HbAlc、血清hs-CRP、TNF-、HMGB1水平高于对照组,APN水平低于对照组,差异具有显著性(均p0.01)。C组患者三项指标(血清hs-CRP、TNF-α、HMGB1)水平均高于A组和B组(均p0.01或p0.05),而APN表达水平低于A组和B组(均p0.01)；B组患者三项指标(血清hs-CRP、TNF-α、HMGB1)水平均高于A组,而APN表达水平低于A组(均p0.01)。C组患者中,随着冠脉病变支数的增加,血清TNF-α、hs-CRP、 HMGB1水平逐步升高,而APN水平逐渐下降,除单支和双支病变组间hs-CRP水平比较差异无显著性外(均P0.05),余指标(TNF-α、HMGB1和Gensini积分)三组间两两比较差异均具有显著性(均P0.01)。C组患者中,血清FPG水平与hs-CRP、TNF-α呈正相关(r值分别为0.909和0.979,P0.01),GHbAlc水平与hs-CRP、TNF-α呈正相关(r值分别为0.884和0.973,P0.01),血清APN水平与TNF-a和hs-CRP呈负相关(r值分别为-0.979和-0.908,P0.01)；血清HMGB1水平与TNF-a和hs-CRP水平呈正相关(r值分别为0.971和0.970,P0.01)。Gensini积分与血清HMGB1、TNF-α和hs-CRP水平均呈正相关(r值分别为0.869,0.697,0.598,P0.01)。结论：TNF-α、hs-CRP、APN和HMGB1均参与了2型糖尿病合并冠心病患者动脉粥样硬化的发生发展,对病情的监测和治疗具有指导意义。第二部分：NURR1在初诊2型糖尿病患者外周血单个核细胞中的表达目的：探讨孤儿核受体NURR1在2型糖尿病(Type 2 diabetes)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的表达变化及意义。方法：招募武汉大学中南医院就诊的40名健康受试者和40名初诊T2DM患者,进行体格检查,包括身高、体重、血压,计算体重指数(body mass index, BMI)；实验室检查：空腹血糖(fasting glucose, FBG)、空腹血胰岛素(fasting insulin, Fins)、总甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein, HDL-C)、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP),计算HOMA-IR。采集外周血2-3ml,收集血浆,用于检测肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor α, TNF-α)、白介素6(interleukin, IL-6);并采用密度梯度离心法获取PBMCs,分别用western-blot及real-time PCR检测NURR1在健康人群和初诊T2DM患者PBMCs中表达情况,并对NURR1 mRNA相对表达水平和HOMA-IR、TNF-α、IL-6进行相关性分析；用western-blot检测健康人群和初诊T2DM患者PBMCs中Gsk-3β磷酸化水平。结果：两组人群在年龄、姓别、血谷丙转氨酶、血尿素氮、血肌酐、BMI、TC、 LDL-C方面,无统计学差异；与对照人群进行比较,初诊T2DM患者的FBG、Fins、 HOMA-IR、TG、CRP、TNF-α和IL-6水平明显增高,血HDL-C水平则降低；T2DM患者的PBMCs的Gsk-3β磷酸化水平、NURR1 mRNA及NURRl蛋白相对表达水平减低,Pearson's相关分析显示,NURR1 mRNA相对表达水平与HDL-c (r= 0.45, p= 0.005)呈正相关,与IL-6 (r=-0.353, p=0.030), TNF-α (r=-0.426,p=0.008), Fins (r=-0.485,p=0.002)和HOMA-IR (r=-0.424, p=0.008)均呈负相关。评价胰岛素抵抗程度的HOMA-IR与TNF-a mRNA(r=0.384,p=0.017)和IL-6蛋白(r=0.36,p=0.027)呈正相关。结论：NURR1表达水平及Gsk-3β磷酸化水平在初诊T2DM患者PBMCs中表达减低,且NURR1与HOMA-IR、TNF-α、和IL-6均呈负相关关系。第三部分：高糖、高脂对人PBMCs中NURR1表达的影响目的：探讨高糖、高脂对人PBMCs孤儿核受体NURR1表达的影响。方法：招募武汉大学中南医院就诊的健康人群,采集外周血,密度梯度离心法收集PBMCs,原代培养。分别予以含16.7及33.3mM葡萄糖或250及500μmol/L PA刺激处理45分钟或24小时,收集细胞,提取蛋白western-blot检测TNF-α、IL-6及NURR1表达水平。结果：250pmol/L PA刺激后与对照组相比能促进PBMCs中IL-6及TNF-α的表达(0.85±0.14vs 0.56±0.09 p0.05、0.90±0.09 vs 0.49±0.14 p=0.01)；500μmol/LPA刺激后与对照组相比显著促进PBMCs中IL-6及TNF-α的表达(1.14±0.1 lvs 0.56±0.09 p0.01、1.08±0.11 vs0.49±0.14p0.01)。给予16.7mmM葡萄糖45分钟Nurrl表达与对照组比较,0.85±0.23vs 1.17±0.33,p0.05无统计学差异；与对照组比较,给予33.3mM葡萄糖45分钟能抑制Nurr1表达,(1.17±0.33 vs0.54±0.17p=0.04)：与对照组比较,给予葡萄糖刺激(16.7mM及33.3mM)24小时均能抑制Nurr1表达,(1.21±0.23 vs0.52±0.22,p0.05；1.21±0.23 vs0.38±0.15,p0.01)。分别给予250,500μmol/L P45分钟或24小时刺激PBMCs后,PBMCs被抑制程度也呈时间及浓度依赖性。结论：高糖高脂刺激在促进人PBMCs分泌TNF-α、IL-6的同时,亦显著抑制NURR1的表达,且高糖高脂对NURR1抑制呈时间及浓度依赖性。
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【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1;R541.4

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