雌激素对类风湿关节炎外周血单个核细胞microRNAs表达的影响

发布时间：2018-11-16 09:26

【摘要】：研究背景：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、系统性的自身免疫疾病,以对称性的多关节炎为主要临床表现,最终导致关节畸形和功能障碍,并累及关节外多种组织和器官,是人类丧失劳动力和致残的主要原因之一。目前RA的发病机制不是很明确,环境因素、遗传易感性、免疫功能紊乱被认为与其关系密切。micro RNAs(mi RNAs)是由高等真核生物基因组编码的一类不编码蛋白质的小分子RNA,通过与靶m RNA碱基互补配对来降解靶m RNA或阻碍其翻译,在转录后水平对基因表达起负性调控作用。大量研究表明mi RNAs在细胞发育,造血过程,器官形成,细胞增殖、凋亡和肿瘤发生,免疫调节等过程中起着重要作用。近年来,mi RNAs在肿瘤、炎症及自身免疫性疾病中的异常表达已成为研究热点。目的：1.通过检测活动期女性RA患者和健康女性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中mi R-146a、mi R-23b表达水平,了解其在RA患者和健康人群之间的表达差异,分析RA患者是否存在mi R-146a和mi R-23b表达异常,并分析二者与RA患者重要的炎性因子白介素-17(interleukin-17,IL-17)的相关性,以及二者与临床实验室相关指标血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体、类风湿因子(rheumatoid factors,RF)、疾病活动评分(DAS)之间的相关性,以明确RA患者PBMCs中mi R-146a和mi R-23b的表达水平及其与疾病相关指标的关系。2.通过测定雌激素处理后的PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的变化,探讨雌激素对mi R-146a、mi R-23b和IL-17表达的影响,以及mi R-146a、mi R-23b分别与IL-17的相关性,揭示雌激素是否对mi R-146a和mi R-23b的表达具有调控作用,阐释雌激素对RA的作用机理。方法1.以34例女性活动期RA患者作为研究对象,收集其空腹外周静脉血,肝素抗凝,分离血浆于-80℃冻存备用,同时无菌分离PBMCs。收集RA患者的临床资料。以40例女性健康体检者作为正常对照(normal control,NC)组。2.将一部分无菌分离的PBMCs即刻用于提取总RNA。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)测定mi R-146a和mi R-23b表达水平作为二者的基础表达值,比较其在RA组与正常对照组之间的差异。3.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血浆中IL-17的浓度,比较IL-17在两组间的差异,分析mi R-146a和mi R-23b基础表达水平与血浆IL-17、ESR、CRP、抗CCP抗体、RF、DAS等临床指标的相关性。4.另一部分无菌分离的PBMCs用于细胞培养。采用浓度为1×10-7mol/L雌二醇(estradiol,E2)分别处理RA组和正常对照组PBMCs6h(同时设未加E2处理的空白孔作为空白对照),分别收集培养上清和细胞。培养上清于-80℃冻存备用。提取PBMCs总RNA,RT-q PCR测定mi R-146a和mi R-23b水平,比较mi R-146a、mi R-23b在RA和NC各组内E2处理组与未处理组(空白对照组)之间的差异。5.经酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中IL-17的浓度,比较E2处理组与未处理组之间的差异,分析mi R-146a、mi R-23b表达水平与培养上清中IL-17浓度的相关性。结果： 1.女性RA患者组与正常对照组比较,PBMCs中mi R-146a基础表达水平[5.12E-03(2.16E-03,14.41E-03)vs 3.48E-03(2.24E-03,5.15E-03),P=0.040],mi R-23b基础表达水平[0.24E-03(0.13E-03,0.67E-03)vs 0.16E-03(0.08E-03,0.31E-03),P=0.041]及血浆IL-17浓度[1.80 pg/ml(0.84,4.89 pg/ml)vs 0.85 pg/ml(0.24,3.51 pg/ml),P=0.047]均显著增高。2.女性RA患者PBMCs中mi R-146a基础表达水平与ESR呈正性相关(R=0.377,P=0.030),与血浆IL-17(R=-0.184,P=0.332)、CRP(R=0.067,P=0.717)、抗CCP抗体(R=-0.116,P=0.520)、RF(R=0.000,P=0.999)、DAS(R=0.289,P=0.097)无显著相关性。女性RA患者PBMCs中mi R-23b基础表达水平与血浆IL-17(R=0.000,P=0.999)、CRP(R=-0.065,P=0.722)、ESR(R=0.041,P=0.820)、抗CCP抗体(R=0.022,P=0.902)、RF(R=-0.005,P=0.979)、DAS(R=-0.149,P=0.401)均无显著相关性。3.PBMCs经浓度为1×10-7mol/L的E2处理6h后(1)RA患者:处理组与未处理组比较,mi R-146a表达水平[4.88E-03(2.88E-03,14.13E-03)vs 4.78E-03(1.82E-03,13.74E-03),P=0.360],mi R-23b表达水平[0.24E-03(0.08E-03,0.78E-03)vs 0.24E-03(0.08E-03,0.66E-03),P=0.755]及IL-17浓度[0.86 pg/ml(0.72,1.01 pg/ml)vs 0.75pg/ml(0.65,0.87 pg/ml),P=0.078]均没有显著差异。结果表明,雌激素对RA患者PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表达均没有明显影响。(2)正常对照:处理组与未处理组比较,mi R-146a表达水平[2.75E-03(2.01E-03,4.91E-03)vs 3.00E-03(1.99E-03,5.20E-03),P=0.563],mi R-23b表达水平[0.12E-03(0.06E-03,0.23E-03)vs 0.13E-03(0.05E-03,0.30E-03),P=0.485]及IL-17浓度[0.76 pg/ml(0.65,0.86 pg/ml)vs 0.76pg/ml(0.72,0.86 pg/ml),P=0.355]均没有显著差异。结果表明,雌激素对健康人群PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表达也没有明显影响。(3)RA患者PBMCs经雌激素处理后,mi R-146a表达水平与培养上清IL-17浓度之间(R=-0.257,P=0.355),mi R-23b与IL-17之间(R=-0.414,P=0.125)没有显著相关性。(4)正常对照组PBMCs经雌激素处理后,mi R-146a表达水平与培养上清IL-17浓度之间(R=0.433,P=0.064)、mi R-23b与IL-17之间(R=-0.233,P=0.338)没有显著相关性。结论： 1.女性活动期RA患者PBMCs中mi R-146a、mi R-23b基础表达水平及血浆IL-17浓度高于正常对照,表明RA患者存在mi R-146a、mi R-23b及IL-17的异常表达,提示增高的mi R-146a、mi R-23b及IL-17可能与RA的病理过程有关。2.女性活动期RA患者PBMCs中mi R-146a基础表达水平与ESR呈正相关,提示PBMCs中增高的mi R-146a可能与RA疾病活动性相关。3.1×10-7mol/L浓度的雌激素在6h时间点上对RA患者及健康人群PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表达均没有明显影响,且mi R-146a与IL-17、mi R-23b与IL-17之间没有相互协同或拮抗的作用。
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【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R593.22

【参考文献】