AGEs通过上调PTEN促进人主动脉血管平滑肌细胞的钙化

发布时间：2018-11-22 16:33

【摘要】：目的:探讨PTEN与人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)钙化的潜在关系,明确PTEN是否能够介导AGEs促进HASMC的钙化。方法:用不同浓度AGEs(25mg/L、50mg/L、100mg/L)分别作用于三组人主动脉平滑肌细胞进行干预培养,设正常条件下(91%DMEM高糖培养基+6%胎牛血清+2%生长因子+1%双抗)培养的HASMC为一空白对照组,培养2天后先取部分细胞提取蛋白,采用western blotting检测各组人主动脉平滑肌细胞成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平,各组剩余细胞于培养10天后行茜素红染色。为明确PTEN是否参与了AGEs促进HASMC钙化的过程,给予不同浓度(0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)及不同时间长度(0h、12h、24h、48h)AGEs干预细胞后,Western blot检测HASMCs中PTEN蛋白的表达水平;引入PTEN特异性抑制剂bpv(Hopic),利用Western blot选取最佳抑制浓度后干预培养HASMC,培养2天后先取部分细胞提取蛋白,采用western blotting检测各组人主动脉平滑肌细胞成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平,各组剩余细胞于培养10天后行茜素红染色。最后,为明确PTEN是否参与了β-磷酸甘油促进HASMC钙化的过程,用10m mol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs+200μmol/L bp V(Hopic)分别作用于三组人主动脉平滑肌细胞进行干预培养,设一空白对照组,培养2天后先取部分细胞提取蛋白,采用western blotting检测各组人主动脉平滑肌细胞成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平,各组剩余细胞于培养10天后行茜素红染色。用10mmol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+200μmol/L bp V(Hopic)分别作用于两组人主动脉平滑肌细胞进行干预培养,设一空白对照组,培养2天后先取部分细胞提取蛋白,采用western blo tting检测各组人主动脉平滑肌细胞成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平,各组剩余细胞于培养10天后行茜素红染色。结果:(1)用不同浓度AGEs进行干预培养后的HASMC其钙化程度及成骨相关蛋白OPG、Run x2、BMP2的表达水平均高于空白对照组,且随着干预所用AGEs浓度的升高而增强。(2)用不同浓度AGEs进行干预培养的HASMC其PTEN蛋白的表达水平均高于空白对照组,且随着干预所用AGEs浓度的升高而增强,给予AGEs干预不同时间后的HASMC,于48h时PTEN蛋白的表达最强。(3)AGEs+bp V(Hopic)干预组细胞的钙化程度及成骨相关蛋白OPG、Runx2、B MP2的表达水平均低于单纯AGEs干预组细胞,但高于空白对照组。(4)β-磷酸甘油组、β-磷酸甘油+AGEs组、β-磷酸甘油+AGEs+bp V(Hopic)组细胞的钙化程度及成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平均高于空白对照组,其中β-磷酸甘油+AGEs组细胞的钙化程度和成骨相关蛋白的表达水平最高。(5)β-磷酸甘油组和β-磷酸甘油+bp V(Hopic)组细胞的钙化程度及成骨相关蛋白OPG、Runx2、BMP2的表达水平均高于空白对照组,但两者之间无明显差别。结论:1.AGEs可促进人主动脉平滑肌细胞的钙化及成骨相关蛋白OPG、RUNX2、BMP2的表达,AGEs可上调人主动脉平滑肌细胞中PTEN蛋白的表达,在PTEN蛋白被抑制后,AGEs促进人主动脉平滑肌细胞钙化及成骨相关蛋白表达的作用降低;3.PTEN对β-磷酸甘油促进人主动脉平滑肌细胞发生钙化的作用无明显影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543;R587.2

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本文编号：2349900