晚期糖基化终产物参与内皮间质转分化的实验研究

发布时间：2018-12-18 07:01

【摘要】：研究背景：糖尿病是一种多因素疾病,其血管并发症是糖尿病患者致残致死的主要原因[1]。糖尿病患者的血管床长期暴露在高糖的环境中是导致其血管发生病理改变的最主要原因。在高糖的环境中,葡萄糖和其他还原糖类与蛋白质的游离氨基可进行非酶促反应,导致了晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End products,AGEs)的加速形成[2]。有大量的研究证明AGEs的过量产生以及在血管中的过量累积会导致和促进糖尿病血管并发症的发生发展[3]。另外,血管内皮细胞的功能障碍是糖尿病血管病变早期阶段的重要特点,内皮细胞受损将会导致血管舒张障碍、血管渗透性增加和血栓形成等一系列的有害影响,有研究发现在糖尿病病人的动脉粥样硬化损伤处可观察到血管内皮发生了内皮/间质转分化(Endothelial to Mesenchymal Transdifferentiation,EnMT),血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)作为内皮细胞特征性的标志物,其表达会下降,而间质细胞的特征性标志物平滑肌肌动蛋白-α (α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)的表达会增加是其重要特点[4],EnMT可导致血管纤维化,血管弹性下降,引发各种血管疾病,而AGEs是否参与EnMT的发生,目前尚未有研究证实。因此,本研究拟通过两部分实验来探明AGEs是否参与EnMT的发生,从而为糖尿病血管并发症的发病机制提供一个新的研究方向。研究目的：实验一：观察糖尿病病人和健康人体内血清AGEs、转化生长因子p(Transforming Growth Factor-β,TGF-β1).金属基质蛋白酶-9(Metal Matrix Protease,MMP-9)以及血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)的水平及其相关性；实验二：观察经AGEs刺激后的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)标志物的表达情况。研究方法：(1)实验一：选取40名2型糖尿病病人与40名健康体检者,收集全部受试者的血清,用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测其中AGEs、TGF-β、MMP-9以及VEGF的含量,结果进行统计分析；(2)实验二：将体外培养的HUVECs细胞株分为两组,分别加入AGEs作为实验组和牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)作为对照组,培养7天后收集细胞提取总蛋白,采用免疫组织化学技术和蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测两组HUVECs中α-SMA和vWF的表达情况,结果进行统计分析。研究结果：实验一：(1)2型糖尿病病人体内的血清AGEs、MMP-9、TGF-β1以及VEGF的水平均高于健康体检者(P0.01,P0.01,P0.05,P0.01)；(2) Pearson相关分析显示：2型糖尿病病人血清AGEs的水平与VEGF(r=0.642, P=0.000)、MMP-9 (r=0.946,P=0.000)、TGF-β1(r=0.786,P=0.000)的水平均呈正相关关系；(3)一元线性回归分析显示：2型糖尿病病人血清AGEs的水平是影响VEGF、MMP-9、TGF-β1水平的独立因素。实验二：与BSA对照组相比,HUVECs经AGE-BSA处理7天后,α-SMA表达增强,vWF表达降低(P0.05)。研究结论：实验一：2型糖尿病病人体内的一些与EnMT相关联的因子(MMP-9、TGF-β1、 VEGF),其水平均高于健康体检者,且AGEs与这些因子关系密切,AGEs的升高可引起这些因子的水平升高；实验二：AGEs可诱导HUVECs发生内皮间质转分化,这种血管内皮细胞的转分化机制可能参与糖尿病血管并发症的发生与发展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

【参考文献】