microRNA-146a在原发性痛风发病中作用的研究

发布时间：2018-12-25 19:02

【摘要】：目的:探讨微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)在原发性痛风(primary gout arthritis,p GA)患者发病中可能的作用。方法:1.miR-146a基因(rs57095329、rs2910164、rs2431697)的单核苷酸多态性与原发性痛风易感性研究:(1)收集606例pGA患者和同时期524例健康体检者(health control,HC)临床及实验室资料,并收集外周静脉血标本。(2)TaqMan?-MGB探针法检测miR-146a基因三个位点(rs57095329、rs2910164、rs2431697)的基因型。(3)统计分析:采用SPSS17.0及SHEsis在线统计软件进行分析,Hardy-Weinberg遗传平衡检验及基因型和等位基因分布频率采用χ2检验,组间比较采用t检验。2.miR-146a在原发性痛风患者不同分期的变化:(1)实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)(TaqMan探针法)检测55例急性期痛风(acute gout,AG)患者、42例间歇期痛风(intercritical gout,IG)患者、23例慢性期痛风(chronic gout,CG)患者及43例HC的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中mi R-146a的表达,并收集pGA患者和HC者的临床及实验室检查指标。(2)检测5例HC的PBMCs经浓度为100μg/ml的尿酸盐(monosodium urate,MSU)(刺激组)和磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)(对照组)刺激12h后炎症因子IL-1β、mi R-146a及其靶分子IRAK1、TRAF6mRNA的表达变化。(3)统计分析:采用SPSS17.0统计软件进行分析,符合正态分布的计量资料使用t检验,不符合正态分布的计量资料采用Wilcoxon秩和检验,变量间的相关性采用Spearman相关分析。结果:1.mir-146a基因(rs57095329、rs2910164、rs2431697)的单核苷酸多态性与原发性痛风易感性研究:(1)mir-146a的三个位点在人群中的分布均符合hardy-weinberg遗传平衡定律(p均0.05)。(2)rs57095329位点的aa、ag、gg基因型在pga组分布频率分别为64.7%、31.0%、4.3%,在hc组分布频率分别为58.4%、35.9%、5.7%,差异无统计学意义(p0.05),等位基因a、g在两组间的分布频率分别为80.2%/19.8%和76.3%/23.7%,差异有统计学意义(p0.05),携带等位基因a的个体发生痛风的风险明显增加[or(95%ci):1.261(1.124-1.414)]。(3)rs2910164、rs2431697位点的基因型及等位基因分布频率在pga组与hc组间比较差异均无统计学意义(p均0.05)。(4)rs57095329位点的aa、ag、gg基因型在有痛风石性痛风(goutwithtophi,gt)患者组分布频率分别为82.9%、15.8%、1.3%,等位基因a、g分布频率分别为90.8%、9.2%,基因型及等位基因分布频率在gt组与hc组间比较差异均有统计学意义(χ2=16.631,p0.01;χ2=15.987,p0.01),携带等位基因a的个体发生痛风石性痛风的风险为3.059(95%ci:1.758-5.323)。(5)rs2910164及rs2431697位点的基因型及等位基因分布频率在gt组与hc组间比较差异均无统计学意义(p均0.05)。(6)rs57095329位点的aa、ag、gg基因型在无痛风石性痛风(nontophigout,ntg)患者组分布频率分别为60.8%、34.4%、4.8%,等位基因a、g分布频率分别为78.0%、22.0%,基因型及等位基因分布频率与gt组比较差异均有统计学意义(χ2=13.210,p0.05;χ2=12.646,p0.01),(7)rs2910164及rs2431697位点的基因型及等位基因分布频率在gt组与ntg组间差异均无统计学意义(p均0.05)。(8)mir-146a三个候选位点(rs57095329、rs2910164、rs2431697)的基因型及等位基因分布频率在ntg组及hc组间比较差异均无统计学意义(p均0.05)。2.mir-146a在原发性痛风患者不同分期的表达:(1)mir-146a在四组pbmcs中的表达存在差异并有统计学意义(f=12.297,p0.01),进一步两两比较发现ag组mir-146a的表达显著低于ig组及hc组(0.1638±0.4310vs0.2631±0.5528,z=-1.966,p0.05;0.1638±0.4310vs0.2900±0.3631,z=-3.308,p0.01),cg组显著低于hc组(0.2475±0.2350vs0.2900±0.3631,z=-2.105,p0.05),而ig组与cg组及hc组比较差异均无统计学意义(p均0.05),cg组与ag组比较差异无统计学意义(p0.05)。(2)健康人pbmcs经msu晶体刺激12h后炎症因子il-1β显著增高(92.63±4.70pg/mlvs20.66±4.74pg/ml;t=10.79,p0.01);mir-146a表达显著降低(0.248±0.014vs0.528±0.046;t=5.76,p=0.0004);mir-146a的靶分子traf6mrna表达水平较对照组显著增加(0.121±0.011vs0.024±0.002;t=8.744,p0.01),而irak1mrna变化差异无统计学意义(0.090±0.005vs0.079±0.005;t=1.539,p=0.162)。(3)spearman相关分析发现急性期痛风患者pbmcs中mir-146a的表达与esr呈负相关(r=-0.355,p=0.031),与其它实验室指标均无相关性(p均0.05)。(4)分别携带rs57095329位点aa、ag、gg的痛风患者pbmcs中mir-146a的表达无明显差异(p均0.05)。结论:(1)mir-146a基因的rs57095329位点多态性可能与我国汉族人群中原发性痛风的易感性相关,a等位基因可能为痛风发病的危险因素。(2)mir-146a基因的rs57095329位点多态性可能与我国汉族人群中痛风石性痛风的易感性相关,A等位基因可能为痛风石性痛风发生的危险因素。(3)目前资料提示miR-146a基因的rs2910164、rs2431697位点多态性与我国汉族人群中原发性痛风发生无显著相关。(4)miR-146a及其靶分子TRAF6在MSU介导的痛风炎症的变化提示miR-146a可能参与痛风炎症的负反馈调节、参与痛风炎症的自发缓解。
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【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R589.7

【参考文献】