TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响

发布时间：2019-03-20 07:51

【摘要】：【目的】探讨TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的作用。【方法】本实验室将降植烷腹腔注射进Apo E-/-小鼠,诱导建立系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠模型;并在此基础上腹腔注射TLR9抑制剂IRS869进行干预后,检测血清中的抗ds-DNA抗体水平和肾脏组织中的Ig G、补体C3、TLR9及TLR9通路分子和VEGF表达水平。ApoE-/-C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠随机分为6组:C57BL/6+生理盐水对照组(A组),Apo E-/-+生理盐水对照组(B组),C57BL/6+降植烷组(C组),Apo E-/-+降植烷组(D组),C57BL/6+降植烷+IRS869组(E组),Apo E-/-+降植烷+IRS869组(F组)。高脂饮食喂养12周,处死动物。取血清进行ELISA检测抗ds-DNA;取肾脏组织提取蛋白和RNA分别进行Western Blot和Real-time PCR检测TLR9及下游信号通路分子和VEGF表达情况;取肾脏组织进行石蜡包埋,免疫荧光检测Ig G和补体C3,Massion染色检测肾脏组织纤维化程度。【结果】1.免疫效应指标1.1血清抗ds-DNA抗体水平(1)降植烷组血清抗ds-DNA抗体水平较C57BL/6对照组明显升高(P0.05),Apo E-/-降植烷组相较Apo E-/-对照组明显升高(P0.05),Apo E-/-降植烷组与C57BL/6降植烷组差异没有统计学意义(P0.05)。(2)降植烷+IRS869组相较降植烷组明显下降(P0.05),Apo E-/-降植烷+IRS869组较Apo E-/-降植烷组明显下降(P0.05)。1.2肾脏免疫荧光情况(1)直接免疫荧光显示降植烷组、ApoE-/-降植烷组IgG在肾小球系膜毛细血管袢成明显连续性分布,对照组偶尔可见散在颗粒状分布,定量分析降植烷组相对于C57BL/6对照组、Apo E-/-降植烷组相对于Apo E-/-对照组有统计学意义(P0.05);间接免疫荧光显示降植烷组、Apo E-/-降植烷组补体C3在肾小球系膜毛细血管袢成明显颗粒状分布,对照组偶尔可见散在颗粒状分布,定量分析降植烷组相对于C57BL/6对照组、Apo E-/-降植烷组相对于Apo E-/-对照组有统计学意义(P0.05)。(2)注射TLR9抑制剂后降植烷+IRS869组、Apo E-/-降植烷+IRS869组分别相对于降植烷组、Apo E-/-降植烷组,在肾小球系膜毛细血管袢上,Ig G和补体C3均明显减少,定量分析差异具有统计学意义(P0.05)。2.TLR9信号通路各分子表达2.1肾脏TLR9及下游信号通路分子蛋白水平表达情况(1)Western-blot分析,降植烷组、Apo E-/-降植烷组TLR9、My D88、NF-κB相对对照组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);Apo E-/-降植烷组TLR9、My D88、NF-κB蛋白水平相对于降植烷组相对升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)降植烷+IRS869组、Apo E-/-降植烷+IRS869组TLR9、My D88、NF-κB的蛋白水平比降植烷组、Apo E-/-降植烷组明显下降,差异具有统计学意义(P0.05),而与对照组相比无明显变化,差异没有统计学意义(P0.05)。2.2肾脏TLR9及下游信号通路分子c DNA水平表达情况(1)PCR分析,降植烷组TLR9、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN的c DNA水平比C57BL/6对照组有升高,差异具有统计学意义(P0.05);Apo E-/-降植烷组TLR9、My D88、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN的c DNA水平比对照组均有明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);而Apo E-/-降植烷组相对于降植烷组在TLR9、My D88、NF-κB有明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)PCR分析,降植烷+IRS869组、Apo E-/-降植烷+IRS869组TLR9、My D88、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN c DNA水平相对降植烷组、Apo E-/-降植烷组明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。3.肾脏纤维化情况3.1肾脏Massion情况(1)降植烷组、Apo E-/-降植烷组肾脏肾小球胶原纤维相对于对照组明显增多,差异具有统计学意义(P0.05),Apo E-/-降植烷组相对于降植烷组纤维化程度也有所升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)降植烷+IRS869组、Apo E-/-降植烷+IRS869组肾脏肾小球胶原纤维相对于降植烷组、Apo E-/-降植烷组明显减少,差异具有统计学意义(P0.05),和对照组相比没有明显差异(P0.05)。3.2 VEGF蛋白水平表达情况(1)Western-blot分析,降植烷组、Apo E-/-降植烷组VEGF相对对照组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。Apo E-/-降植烷组相对于降植烷组升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)降植烷+IRS869组、Apo E-/-降植烷+IRS869组VEGF的蛋白水平比降植烷组、Apo E-/-降植烷组明显下降,差异具有统计学意义(P0.05),而与对照组相比无明显变化,差异没有统计学意义(P0.05)。【结论】1.降植烷能诱导Apo E-/-小鼠产生抗ds-DNA抗体,降植烷能与Apo E基因敲除协同刺激肾脏肾小球Ig G、补体C3沉淀。2.抗ds-DNA抗体通过活化和结合TLR9激活下游信号通路,NF-κB核转移,促进VEGF生成与活化,加速了肾组织纤维化的进程,表明TLR9介导了本实验小鼠狼疮样动脉硬化肾损伤效应。3.抑制TLR9可以逆转SLE合并动脉粥样硬化肾脏纤维化。
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【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R593.241

【参考文献】