脂滴包被蛋白5对高糖高脂诱导的小鼠心脏微血管内皮细胞凋亡的影响及机制

发布时间：2019-06-05 07:59

【摘要】：目的探讨脂滴包被蛋白5(Plin5)对高糖高脂诱导的小鼠心脏微血管内皮细胞凋亡的影响及其机制。方法将高糖培养基培养的小鼠心脏微血管内皮细胞(MCMECs)分别给予0、100、300、500μmol/L棕榈酸干预24h。为探索Plin5对高糖高脂诱导MCMECs损伤的影响及机制,在300μmol/L棕榈酸干预24h基础上利用siRNA转染敲低细胞的Plin5表达,将细胞分为对照组(仅给予转染试剂处理)、Scra siRNA组(给予转染试剂+非特异阴性siRNA处理)、Plin5siRNA组(给予转染试剂+Plin5特异性siRNA处理)。为进一步验证Plin5在高糖高脂导致MCMECs损伤的具体机制,利用siRNA敲低Plin5表达,再将细胞分为Vehicle组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组,并给予相同条件的高脂干预。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR及Western blotting分别检测细胞Plin5 mRNA及蛋白表达,DHE染色及ELISA试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果 MCMECs凋亡率随着棕榈酸浓度的升高而增加(P0.05)。与0μmol/L棕榈酸相比,300μmol/L棕榈酸干预后细胞内ROS含量明显增加,Plin5表达也明显升高(P0.05)。在300μmol/L棕榈酸作用下,与对照组及Scra siRNA组相比,Plin5 siRNA组细胞内ROS含量及凋亡率明显增加(P0.05)。与Vehicle组比较,NAC组细胞ROS水平及细胞凋亡率均明显降低(P0.05)。结论 Plin5可通过抑制氧化应激反应减少高糖高脂诱导的小鼠心脏微血管内皮细胞凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lipid drop coated protein 5 (Plin5) on apoptosis of cardiac microvascular endothelial cells induced by high glucose and high fat in mice and its mechanism. Methods (MCMECs) of mouse cardiac microvascular endothelial cells cultured in high glucose medium were treated with 0 100300500 渭 mol / L palmitic acid for 24 h. In order to explore the effect and mechanism of Plin5 on MCMECs damage induced by high glucose and high fat, the cells were treated with 300 渭 mol / L palmitic acid for 24 h, and the cells were divided into control group (treated with transfection reagent only). Scra siRNA group (treated with non-specific negative siRNA) and Plin5siRNA group (treated with Plin5 specific siRNA). In order to further verify the specific mechanism of Plin5 damage induced by high glucose and high fat, siRNA was used to knock down the expression of Plin5, and then the cells were divided into Vehicle group and N-acetylcystine (NAC) group, and the cells were given high fat intervention under the same conditions. The apoptosis rate was detected by flow cytometry, the expression of Plin5 mRNA and protein was detected by qRT-PCR and Western blotting, and the content of reactive oxygen species (ROS) in cells was detected by DHE staining and ELISA kit. Results the apoptosis rate of MCMECs increased with the increase of palmitic acid concentration (P 0.05). Compared with 0 渭 mol / L palmitic acid, the content of ROS and the expression of Plin5 increased significantly after 300 渭 mol / L palmitic acid intervention (P 0.05). Under the action of 300 渭 mol / L palmitic acid, the intracellular ROS content and apoptosis rate in Plin5 siRNA group were significantly higher than those in control group and Scra siRNA group (P 0.05). Compared with Vehicle group, the level of ROS and apoptosis rate in NAC group were significantly decreased (P 0.05). Conclusion Plin5 can reduce the apoptosis of cardiac microvascular endothelial cells induced by high glucose and high fat by inhibiting oxidative stress.
【作者单位】： 陆军军医大学(第三军医大学)研究生管理大队;成都军区总医院心血管内科;西南医科大学临床医学院;
【基金】：国家自然科学基金(81500208) 四川省杰出青年基金(2017JQ0012) 中国博士后基金(2017M613429) 四川省医学科研青年创新课题(Q14005) 成都军区总医院博士后医院管理基金(41732BA)~~
【分类号】：R587.1

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本文编号：2493368