PAI-1对气道平滑肌增殖和ERK表达的影响

发布时间：2019-06-16 15:29

【摘要】：目的探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)对气道平滑肌增殖的调控作用,以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达的影响。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)并分为7组:空白对照组、PAI-15μg/L组、PAI-1 10μg/L组、PAI-1 20μg/L组、PAI-1 40μg/L组、PAI-1 80μg/L组、PAI-1 100μg/L组。放入37℃培养箱分别培养12、24和48 h,采用CCK-8检测ASMCs的A值,计算增殖率。以增殖率最高的实验组的浓度和作用时间作为PAI-1作用最适浓度和最适作用时间,进一步分6组:A组(空白对照);B组(PAI-1 20μg/L);C组(PAI-1 40μg/L);D组(PAI-1 80μg/L);E组(PAI-1 100μg/L);F组(PAI-1最适浓度+ERK通道抑制剂PD98059 10μmol/L),用CCK-8检测ASMCs的增殖,Western blot检测ERK蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测ERK m RNA的表达。结果 5~100μg/L PAI-1作用ASMCs 12、24和48 h后细胞增殖率结果显示,在相同浓度下,不同时间各组比较,差异有统计学意义(P0.05),以48 h时ASMCs增殖率最高;在相同时间下,不同浓度各组比较,差异有统计学意义(P0.05),80μg/L PAI-1的ASMCs增殖率最高;故选取48 h为最适作用时间,80μg/L为最适浓度进行后续实验。再次分组的实验结果表明,B、C、D、E组的ERK磷酸化水平和ERK m RNA的相对表达量与A组比较,差异有统计学意义(P0.05),B、C、D、E组增高;B、C、D、E组两两比较结果显示,除B组与E组比较,差异无统计学意义(P0.05)外,其余各组两两比较,差异有统计学意义(P0.05),当PAI-1浓度波动于20~80μg/L时,ERK磷酸化水平和ERK m RNA相对表达量随浓度升高而增高,80μg/L后则不再增高;加入PD98059的F组与D组比较,差异有统计学意义(P0.05),ERK磷酸化水平和ERK m RNA表达降低。结论外源性PAI-1可以通过促进ERK通路的表达,进而促进ASMCs的增殖。
[Abstract]:Objective to investigate the regulatory effect of plasmin activating inhibitor-1 (PAI-1) on the proliferation of airway smooth muscle and the expression of extracellular regulated protein kinase (ERK). Methods (ASMCs) of mouse airway smooth muscle cells were cultured in vitro and divided into 7 groups: blank control group, PAI- 15 渭 g / L group, PAI-1 10 渭 g / L group, PAI-1 20 渭 g / L group, PAI-1 40 渭 g / L group, PAI-1 80 渭 g / L group, PAI-1 100 渭 g / L group. The A value of ASMCs was detected by CCK-8 in 37 鈩，

本文编号：2500637