糖尿病干眼大鼠模型中眼表变化和PPARγ的研究

发布时间：2019-07-17 07:03

【摘要】：目的:糖尿病是慢性、代谢性内分泌系统疾病,可引起一系列眼表疾病。干眼是常见的糖尿病眼表疾病,其发病机制目前尚不清楚。过氧化物酶体增生物激活受体γ属于核受体超家族,通过与不同功能的配体结合发挥作用,其激动剂已广泛应用于糖尿病降血糖及其并发症的治疗。本研究通过在糖尿病大鼠模型上诱导干眼探讨糖尿病合并干眼大鼠模型的建立方法和眼表改变以及PPARγ在糖尿病合并干眼大鼠模型中角膜,结膜的表达。方法:40只健康雄性Vistar大鼠,采用随机数字表法分为4组:A.正常对照组(Normal组)10只;B.干眼组(DE组)10只;C.糖尿病组(DM组)10只;D糖尿病干眼组(DE+DM组)10只。采用单次鼠尾静脉注射1mg/50μL链脲佐菌素(STZ)45mg/kg体重(稀释于0.2%柠檬酸钠缓冲液,PH4.5)诱导糖尿病模型,大鼠自由饮水进食72h后,尾静脉取血测血糖,以血糖≥30mmol/L作为糖尿病大鼠模型造模成功的标准。Wistar大鼠干眼模型诱导方法是右眼应用0.1%苯扎氯铵(溶于0.9%Nacl)20μL点眼,一天两次(8:00;17:00)。分别于造模前及造模后每周测大鼠体重及鼠尾静脉取血测血糖水平,观察大鼠糖尿病模型稳定性。四组大鼠分别于用药后7、14、21、28天检测泪液分泌试验(ShirmerⅠtest,SIt)、泪膜破裂时间(Break-up time,BUT)、角膜上皮荧光素钠染色评分,并于用药后28天给药及检查结束后,取大鼠右眼眼球及角膜,结膜组织,进行角膜HE染色观察角膜水肿,各层细胞排列紊乱,异常增生等形态变化;结膜PAS染色观察结膜杯状细胞形态学异常和数量变化情况;大鼠角膜,结膜组织应用Real-time PCR法检测PPARγmRNA的表达水平。结果:Wistar大鼠糖尿病模型诱导后,血糖持续≥30mmol/L,糖尿病,糖尿病干眼组大鼠与正常对照组大鼠相比,体重增长不佳,结果均有统计学意义(均P0.001),说明糖尿病模型诱导成功且稳定。干眼临床指标结果显示,与正常对照组相比,干眼,糖尿病,糖尿病干眼组大鼠晚期泪液分泌量下降(21天:Normal组vs DE组,P0.05;Normal组vs DM组,P0.001。28天:Normal组vs DM组,P0.05;Normal组vs DE+DM组,P0.01),然而三个实验组大鼠之间泪液分泌量减少无明显差异(均P0.05);干眼和糖尿病组大鼠泪膜破裂时间均明显降低,差异有统计学意义(Normal组vs DE组:7天,P0.05;21天,28天,均P0.001;Normal组vs DM组:21,28天,均P0.01;Normal组vs DE+DM组:7,14,21,28天,均P0.01),糖尿病干眼组大鼠与糖尿病组大鼠相比,造模后14,21,28天时泪膜不稳,泪膜破裂时间降低,结果有统计学差异(均P0.001),干眼组大鼠与糖尿病干眼组大鼠相比,泪膜破裂时间结果无统计学差异(P0.05);角膜荧光素钠染色结果显示与正常对照组相比,干眼,糖尿病,糖尿病干眼组大鼠角膜表面荧光素钠明显着染,结果有统计学差异(Normal组vs DM组:7天,P0.001;Normal组vs DE组:14,21,28天,均P0.001;Normal组vs DE+DM组,7,14,21,28天,均P0.001),糖尿病组与糖尿病干眼组大鼠相比,造模后21,28天结果有统计学差异(均P0.001)。角膜HE染色结果显示,糖尿病干眼组大鼠比糖尿病组,干眼组大鼠角膜更加水肿增厚,上皮细胞异常增生,排列紊乱,干眼组和糖尿病组大鼠角膜异常程度接近。结膜PAS染色结果显示,干眼,糖尿病,糖尿病干眼组大鼠结膜杯状细胞萎缩,形态异常,数量明显减少,糖尿病干眼组与干眼,糖尿病组大鼠相比,结膜杯状细胞数目更加减少,结果有统计学意义(DM组vs DE+DM组,P0.05;DE组vs DE+DM组,P0.01)。与正常对照组相比,糖尿病,糖尿病干眼组大鼠角膜,结膜PPARγmRNA表达上调,结果有统计学意义(Normal vs DM,Normal vs DE+DM,均P0.01),DE组和DE+DM组结果相比,PPARγmRNA表达明显上调(P0.01)。结论:糖尿病和干眼Wistar大鼠泪膜稳定性降低,角膜和结膜杯状细胞形态学异常,糖尿病与干眼因素相结合加重大鼠干眼程度,角膜损伤,结膜杯状细胞萎缩,数目降低。大鼠角膜,结膜PPARγmRNA表达与糖尿病和干眼因素相关。
文内图片：各组大鼠体重（***，P<0.001）

图片说明：天津医科大学硕士学位论文结果2.1 大鼠体重和血糖糖尿病大鼠模型诱导成功后自由饮水与进食，正常饲检测体重，发现大鼠体重增长不佳，与正常对照组相比，有统计学意义（均 P <0.001）（图 1）。本实验以鼠尾静脉取作为大鼠糖尿病模型诱导成功的标准，正常 Wistar 大鼠随观察大鼠血糖检测结果，糖尿病造模后正常饲养 7，14，2脉鼠尾静脉随机血糖均大于 30mmol/L（表 6），大鼠体重和糖尿病模型诱导成功且稳定，有利于实验的进一步研究。
文内图片：

图片说明：素对于早期泪液分泌无明显影响，，晚期可影响泪液分泌，三个实验组相比，泪液分泌量减少无明显差异，干眼和糖尿病两个因素叠加并不能明显加重泪液分泌量降低（图2）。图2 各组大鼠泪液分泌试验2.2.2 BUT与正常对照组相比，干眼组大鼠在用药后7天，21天，28天，泪膜破裂时间明显缩短，差异有统计学意义（7天，P<0.05；21天，28天
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R-332;R587.2

【参考文献】