胰高血糖素样肽-1对抗HUVEC细胞氧化损伤并抑制PANC-1细胞迁移

发布时间：2019-07-21 06:18

【摘要】：研究背景糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,控制不良会引起许多并发症,其中血管并发症是糖尿病患者死亡的主要原因。内皮细胞损伤是糖尿病血管损伤过程中最早出现的病理现象。在糖尿病状态下,长期的高血糖血症刺激,诱导发生氧化应激,造成血管内皮细胞损伤。当机体受到有害刺激时,体内氧化与抗氧化系统失衡,从而引起组织细胞发生氧化损伤。研究发现,在糖尿病状态下,内皮细胞ROS生成增多,导致发生氧化应激,从而引起糖尿病心血管损伤。机体内抗氧化应激的酶也有很多,如过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)。它们构成抗氧化系统,维持氧化与抗氧化的动态平衡。GLP-1作为一种治疗糖尿病的新型药物,不仅可以降低血糖,还可以抑制氧化应激引起的血管内皮细胞损伤,但其抗氧化应激损伤的机制尚未阐明。另外,GLP-1可直接促进细胞增殖,提高细胞生存,例如胰岛β细胞、神经细胞、纤维母细胞和心肌细胞。那么,GLP-1对肿瘤细胞是否也存在类似的促增殖作用?GLP-1长期用药是否存在致癌风险?目前还未有定论。再有,氧化应激被证实可诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT),GLP-1的抗氧化应激作用是否会对肿瘤细胞的EMT转化产生影响,目前尚未见报道。目的1、探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对过氧化氢(H202)诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制。2、探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对PANC-1细胞增殖和EMT的影响。方法1、取人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、H202组、GLP-1组、H2O2+10nmol/L GLP-1 组、H202+100nmol/L GLP-1 组、H202+1000nmol/L GLP-1组。采用荧光显微镜检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平、观察细胞骨架F-actin变化和过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)蛋白表达;采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率;Western Blotting检测磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)蛋白水平;实时荧光定量聚合酶链锁反应(QPCR)检测抗氧化酶:过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)基因的表达变化。2、CCK8试剂盒检测胰腺癌细胞(PANC-1)增殖;细胞划痕实验和transwell实验检测PANC-1细胞的迁移。实时荧光定量聚合酶链锁反应(QPCR)检测上皮间质转化(EMT)相关基因E-钙黏素(E-cadherin)和N-钙黏素(N-cadherin)的表达变化。结果1、H2O2组HUVEC细胞骨架破坏明显,细胞内ROS含量增加,细胞凋亡率增加;加入GLP-1后,细胞骨架破坏受到显著抑制,ROS含量减少,凋亡率降低。Western Blotting结果显示,H2O2组p-mTOR表达降低,GLP-1可以提高p-mTOR表达,使蛋白水平趋于正常;加入GLP-1受体拮抗剂艾塞纳肽(9-36)后,GLP-1不能上调p-mTOR表达。H202作用后,CAT、SOD2和GPX1基因表达降低,CAT和GPX1蛋白表达量也降低,而GLP-1可以逆转这些抗氧化酶表达的降低。2、不同浓度的GLP-1对PANC-1细胞增殖率没有影响,但是可以抑制PANC-1细胞迁移。H202作用于PANC-1细胞后,E-cadherin基因表达下调,N-cadherin基因表达上调,GLP-1可逆转E-cadherin基因表达下降和N-cadherin基因表达升高。结论1、GLP-1可能通过增加p-mTOR蛋白表达,活化mTOR通路起保护作用;GLP-1通过上调CAT、SOD2和GPX1表达,抑制ROS产生,保护内皮细胞对抗氧化应激损伤。2、GLP-1对PANC-1细胞增殖没有影响,但是可以抑制PANC-1细胞迁移。3、GLP-1抑制H202诱导胰腺癌PANC-1细胞的EMT。
【图文】：

Ｈ２０２邋（５０0ｎｍｏｌ／Ｌ）作用８ｈ后细胞内ＲＯＳ含量明显增加，而ＧＬＰ－１逡逑可有效降低ＲＯＳ含量，，且呈浓度依赖性，１０００ｎｍｏｌ／Ｌ邋ＧＬＰ－１可使细胞内ＲＯＳ逡逑水平接近正常细胞水平（图１．２）。逡逑２１逡逑

ＧＬＰ－丨使凋亡率从１１．８％邋±１．３下降到６．８５％±０．２５，差别具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。逡逑ｌＯＯＯｎｍｏｌ／Ｌ邋ＧＬＰ－１使调亡率从１１．８％邋±１．３下降到５．６％±１．６，差别具有统计学意逡逑义（Ｐ＜０．０５），并且呈现出浓度依赖性（图１．３）。以上结果说明，Ｈ２０２作用于逡逑２２逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.1

【参考文献】

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1 张一馨;匡洪宇;;胰高血糖素样肽-1与癌症相关性的研究进展[J];癌症进展;2015年03期

2 陈志强;邓勇志;;mTOR信号通路与心血管疾病的研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年08期

3 齐丽艳;;关于糖尿病的新诊断标准与分型[J];求医问药(下半月);2013年01期

4 Natalia JURA,Herbert ARCHER,Dafna BAR-SAGI;Chronic pancreatitis, pancreatic adenocarcinoma and the black box in-between[J];Cell Research;2005年01期

5 钱荣立;关于糖尿病的新诊断标准与分型[J];中国糖尿病杂志;2000年01期

本文编号：2516966