TXNIP对胰岛β细胞衰老的影响及机制的初步研究
发布时间：2019-07-21 13:50
【摘要】：目的：探讨TXNIP对胰岛β细胞衰老的影响及TXNIP可能参与的影响衰老的信号通路,寻找潜在的胰岛β细胞老化的治疗靶点,为糖尿病的防治提供新思路。方法：小鼠MIN6细胞通过稳定转染方法构建TXNIP沉默(MIN6-KO)及过表达(MIN6-OE)的细胞株,空载质粒(MIN6-GFP)为对照组。稳定转染的细胞按常规方法进行培养,RT-PCR及western blot检测不同代数沉默及过表达TXNIP后MIN6细胞中P16ink4a、EZH2, TRX基因及蛋白的改变,流式细胞术检测细胞周期,衰老相关-β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞率,MTT法检测细胞增殖,胰岛素还原法检测TRX活性。进一步检测沉默TXNIP基因后高糖刺激下P38MAPK和ERK1/2及其磷酸化的变化,抑制剂PD169316、PD98059抑制信号通路后,观察P38MAPK、 ERK1/2蛋白磷酸化的变化及TXNIP、TRX、P16ink4a、EZH2的变化情况。结果：在MIN6细胞中,随传代次数的增加TXNIP的表达增加(P0.05)。过表达TXNIP后P16ink4a表达增加(P0.05),EZH2表达减少(P0.05),TRX表达减少,活性降低(P0.05)；细胞衰老明显,细胞周期呈现G1→S期阻滞,增殖抑制。沉默TXNIP后MIN6细胞P16ink4a表达降低(P0.05),TRX表达升高,活性增加(P0.05), EZH2表达升高无统计学意义(P0.05),并且沉默TXNIP后细胞增殖增加,衰老延缓。高糖刺激下,沉默TXNIP的MIN6细胞较对照组P38MAPK磷酸化水平降低,ERK1/2磷酸化水平升高。P38MAPK通路抑制后,TXNIP、P16ink4a表达均降低,TRX、EZH2表达无明显变化(P0.05),但TRX活性升高(P0.05)。抑制ERK1/2通路后,TXNIP、P16ink4a表达均升高(P0.05),EZH2表达降低(P0.05),TRX表达无明显变化(P0.05),活性有降低趋势,但无统计学意义(P0.05)。结论：TXNIP是胰岛β细胞衰老的相关蛋白之一,参与了胰岛β细胞衰老的调控。TXNIP表达上调可以促进胰岛β细胞衰老,抑制增殖；减少TXNIP的表达可以减缓胰岛β细胞的衰老,提高增殖速率。沉默TXNIP后可以抑制高糖刺激下P38MAPK通路的活化,促进ERK1/2的磷酸化。P38MAPK和ERK 1/2信号通路是调节胰岛β细胞中TXNIP与P16ink4a表达的信号通路,也可能是TXNIP介导的胰岛β细胞衰老的信号通路。
【图文】：
逡逑（图４Ｂ），与ＭＩＮ６－Ｇ阳细胞相比，过表达ＴＸＮＩＰ的ＭＩＮ６细胞的表现出Ｇ１期增逡逑力口，Ｓ期减少；沉默ＴＸＮＩＰ组则表现出Ｓ期增加，Ｇ１期减少（尸＜０．邋０５）（图４邋Ｃ），逡逑提示在ＴＸＮＩＰ过表达后出现Ｇ１—Ｓ期阻滞，从而影响细胞增殖，而ＴＸＮＩＰ沉默的ＭＩＮ６逡逑细胞则不产生这一阻滞，Ｓ期逐渐延长。随着传代系数的增加，过表达ＴＸＮＩＰ的细逡逑胞表现出持续的Ｇ１期X椉樱悠诩跎伲聊裕兀危桑械南赴虿徊嗣飨愿谋洹ｅ义献凵纤觯裕兀危桑锌桑锥韵赴芷诩跋赴鲋巢盒杂跋欤泶铮裕兀危桑泻箦义匣峒铀傧赴ダ希趼湓鲋场ｅ义狭膶甦蕕k榦逡逑、＂、６卿Ｒ邋＇逦ＭｌＸｅ＾ＫＯ邋‘邋．私．邋＇邋，知：，＇的ＩＮＷＫ邋Ｖ－；，，：旅逡逑枺姦阻裳榦逡逑辆晈巧《巧贿媭嫉Ｉ妑＾披ｆ店畿
下降了邋７６％邋（八化０１），而ＴＸＮＩＰ沉默组ＴＲＸ活性增高约２０％。在过表达ＴＸＮＩＰ逡逑的高代数组ＭＩＮ６细胞中，ＴＲＸ活性下降更为明显，而在ＴＸＮＩＰ沉默的ＭＩＮ６细胞中，逡逑ＴＲＸ仍可１＾１保持高活性，较对照组X椉恿饲桑ュ澹ɑ埃担ㄍ迹罚╁义希保
本文编号：2517224
【图文】：
逡逑（图４Ｂ），与ＭＩＮ６－Ｇ阳细胞相比，过表达ＴＸＮＩＰ的ＭＩＮ６细胞的表现出Ｇ１期增逡逑力口，Ｓ期减少；沉默ＴＸＮＩＰ组则表现出Ｓ期增加，Ｇ１期减少（尸＜０．邋０５）（图４邋Ｃ），逡逑提示在ＴＸＮＩＰ过表达后出现Ｇ１—Ｓ期阻滞，从而影响细胞增殖，而ＴＸＮＩＰ沉默的ＭＩＮ６逡逑细胞则不产生这一阻滞，Ｓ期逐渐延长。随着传代系数的增加，过表达ＴＸＮＩＰ的细逡逑胞表现出持续的Ｇ１期X椉樱悠诩跎伲聊裕兀危桑械南赴虿徊嗣飨愿谋洹ｅ义献凵纤觯裕兀危桑锌桑锥韵赴芷诩跋赴鲋巢盒杂跋欤泶铮裕兀危桑泻箦义匣峒铀傧赴ダ希趼湓鲋场ｅ义狭膶甦蕕k榦逡逑、＂、６卿Ｒ邋＇逦ＭｌＸｅ＾ＫＯ邋‘邋．私．邋＇邋，知：，＇的ＩＮＷＫ邋Ｖ－；，，：旅逡逑枺姦阻裳榦逡逑辆晈巧《巧贿媭嫉Ｉ妑＾披ｆ店畿
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