FSHβ协同BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化及其机制的研究

发布时间：2019-09-04 20:55

【摘要】：PMOP在中、老年女性中常表现为无症状的骨密度降低,故容易被忽略而引发严重后果,目前关注度逐年渐增,且亟待更加有效的治疗方案。拥有良好成骨效应的MSCs常用于各种骨相关疾病的研究和治疗。FSH是与女性绝经期骨重塑非常相关的一种垂体糖蛋白激素,其常通过特异性β亚基(FSHβ)与FSHR受体结合而发挥直接的生理效应。BMP9是一种潜在高效的促成骨因子,且在MEFs中能上调FSHβ的表达。然而,过表达FSHβ能否影响BMP9对MEFs的骨向分化,目前还不清楚。在本实验中,我们探究了FSHβ在BMP9诱导MEFs成骨分化过程中的作用及其可能的机制。我们发现过表达FSHβ能显著增加BMP9诱导MEFs骨化过程中的ALP活性、早期成骨因子(如:Runx2和Osx)和晚期成骨指标(如:OCN和OPN)的表达,以及钙盐沉积。在机制方面,过表达FSHβ能明显增强BMP9诱导MEFs骨化过程中BMP/Smad信号转导,表现为在磷酸化Smad1/5/8、Smad6,以及Smad7的增加;而运用FSHβ的抗体耗竭并阻碍其作用的时,却表现为相反的作用。此外,运用腺苷酸环化酶抑制剂,能明显减弱FSHβ对BMP9诱导MEFs过程中的ALP活性和BMP/Smad信号转导。综上所述,我们发现FSHβ可能部分通过增强FSH/FSHR/c AMP依赖的BMP/Smad信号转导途径,从而协同BMP9诱导MEFs成骨分化。
【图文】：

图 1.1 FSHβ、BMP9 和 FSHR 在 MSCs 中有内源性表达Fig1.1 The endogenous expression of FSHβ,BMP9,and FSHR in MSCs2.2 在 MEFs 中，FSHβ 能上调 BMP9 的表达，而 BMP9 也能部分上调 FSHβ由于在四种 MSCs 中，FSHβ 对 BMP9 诱导 MEFs 的 ALP 活性的协同作用最显著和稳定（图 S1,S2），故后续实验选择 MEFs 细胞。那么随后我们检测了在MEFs 中，BMP9 与 FSHβ 对相互表达的影响。采用随病毒滴度依次增加的 Ad-BMP9或 Ad-FSHβ 转染 MEFs，并在 24h 观察的荧光感染率（图 1.2A，1.3A），以及 Westernblot 结果显示在 MEFs 中，BMP9 部分上调 FSHβ 的表达（图 1.2B），以及 FSHβ也能上调 BMP9 的表达（图 1.3B）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文2 结果2.1 FSHβ、BMP9 和 FSHR 在 MSCs 中有内源性表达本实验中，我们首先检测了几种 MSCs 中 FSHβ、BMP9 和 FSHR 的内源性表达，即：C3H10T1/2、MEFs、C2C12 和 MC3T3-E1。运用 RT-PCR 检测到在该几种 MSCs 中有 FSHβ、BMP9 和 FSHR 的表达（图 1.1A）,运用 Western blot 检测到在该几种 MSCs 中有 FSHβ 和 BMP9 的表达（图 1.1B）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R580

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本文编号：2531995