原发性痛风性关节炎患者单个核细胞中长链非编码RNA差异表达谱的研究

发布时间：2019-09-15 20:51

【摘要】：目的:分析鉴定原发性痛风性关节炎(primary gouty arthritis,GA)患者PBMCs中长链非编码RNA(long noncoing RNA,lncRNA)的表达,筛选与痛风相关的差异表达lncRNAs,重点研究AJ227913在GA发病机制中可能的作用,并结合临床数据探讨其潜在的临床意义。方法:1).采集健康体检者和原发性痛风患者外周血标本各3例,分离提取总RNA,并逆转录为cDNA。利用lncRNA表达谱芯片技术,检测两组间差异表达lncRNAs。差异表达的基因进行GO及Pathway分析;2).选取痛风患者急性期(AGA)30例,非急性期(NAGA)24例及健康对照(HC)24例,懫用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)扩大样本量对筛选出的感兴趣的lncRNA进行验证,同时进一步行生物信息学分析。3).选择关键信号节点分子,利用RT-qPCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)在转录和翻译水平及临床相关性进行验证;4).选取NAGA组和HC组各5例,100ug/ml尿酸盐刺激全血后提取PBMCs,分别用RT-qPCR和ELISA检测感兴趣的lncRNA及关键信号节点分子转录表达水平,和血浆中蛋白表达量。结果:1).lncRNA表达谱芯片比较发现,2倍以上差异表达的lncRNA共1815个(P0.005),上调表达875个,下调表达有940个;GO分析发现差异表达的基因主要参与蛋白结合、转录调节、代谢、信号转导等;Pathway分析显示它们主要参与细胞因子和炎症反应途径,糖皮质激素受体调节网络等。扩大样本验证感兴趣的lnc RNA与芯片结果基本吻合;AJ227913、AK001903、ENSG00000239182在AGA、NAGA患者均显著高于HC组(P均0.05),AGA、NAGA组无统计学差异;lnc-CCDC64B-1:8在AGA、NAGA患者均显著低于HC组;2).IL-8在转录水平和血浆中蛋白浓度AGA组显著高于NAGA组,NAGA组显著高于HC组(P均0.05);AJ227913与IL-8转录水平表达在AGA和NAGA呈正相关(r=0.475,r=0.910,P均0.05);AJ227913转录水平与血浆中IL-8蛋白浓度在AGA和NAGA呈正相关(r=0.971,r=0.814,P均0.05);转录水平和血浆中IL-8在AGA和NAGA呈正相关(r=0.453,r=0.933,P均0.05);3).HC组外周血经100μg/ml的MSU刺激6h后AJ227913表达与刺激对照组无明显差异。NAGA组患者外周血经100μg/ml的MSU刺激6h后AJ227913的表达较刺激对照组显著升高(P0.05);HC和NAGA组外周血经100μg/ml MSU刺激6h后血浆中IL-8蛋白浓度较前明显升高,NAGA组外周血经MSU刺激后IL-8基因表达量较前显著升高(P0.05),HC组外周血经MSU刺激后IL-8的基因表达量较前无明显差异;4).AJ227913转录水平与尿素(UREA)(r=0.608,P0.05)、肌酐(CREA)(r=0.337,P0.05)、胱抑素(CYSC)(r=0.422,P0.01)呈正相关。结论:1).与健康体检者相比,痛风患者lncRNAs表达谱发生了显著变化。其中AJ227913、AK001903、ENSG00000239182在痛风患者中表达上调,lnc-CCDC64B-1:8在痛风患者中表达下降。2).AJ227913在痛风患者中的异常表达提示其可能参与了痛风的炎症反应过程,因此,可能从新的角度阐释原发性痛风性关节炎的发病机制。
【图文】：

差异表达,聚类分析

GA组和HC组的lncRNAs表达谱芯片扫描结果

差异表达,聚类分析

差异表达lncRNAs(A)和mRNAs(B)的聚类分析
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R589.7

【参考文献】