GLP-1拮抗活性氧对AGEs诱导乳鼠成纤维细胞凋亡的保护作用

发布时间：2019-10-22 23:36

【摘要】：为研究胰高血糖素样肽-1(Glucogon like peptide-1,GLP-1)对晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End Products,AGEs)诱导成纤维细胞凋亡的影响及其机制研究。体外培养成纤维细胞,实验分为5组:正常对照组,200 mg/L AGEs试验组,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(5 nmol/L)组,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(10 nmol/L)以及AGEs(200 mg/L)+GLP-1(20 nmol/L)组,处理24 h。通过CCK-8比色法检测细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片观察细胞内活性氧(ROS)水平;运用Hoechst33258检测试剂盒及流式细胞术检测成纤维细胞的凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2的表达量。结果表明:与正常组相比,200 mg/L AGEs组降低成纤维细胞生存率,活性氧(ROS)生成量增加;与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组成浓度依赖性提高细胞生成率,活性氧(ROS)含量减少。与正常组相比,AGEs组导致促凋亡蛋白Caspase-3增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2减少,细胞凋亡率升高;AGEs+GLP-1组较AGEs组下调促凋亡蛋白Caspase-3,上调抑制蛋白凋亡Bcl-2,细胞凋亡率减少。由此可见,GLP-1可以通过拮抗活性氧(ROS)发挥对AGEs诱导的成纤维细胞凋亡的保护作用。
【图文】：

h。结果显示200mg/L处理细胞生成率明显降低，而AGEs+GLP-1组成浓度依赖性提高细胞生成率。表1GLP-1对成纤维细胞生成率的影响Table1EffectsofGLP-1oncellviabilityofdifferentgroups组别Group细胞生成率Cellviability(%)ofcontrol(mean±SD)NormalControl94．17±3．38200mg/LAGEs68．16±2．24##200mg/LAGEs+5nmol/LGLP-174．22±3．11200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-178．68±1．96*200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-182．66±1．62*注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vsAGEsgroup．3．2细胞形态学观察如图1所示，运用倒置相差显微镜观察发现:正常组细胞呈圆形，排列规整，大小均一，胞核、胞质境界清楚。200mg/LAGEs损伤组细胞大小不规则，胞体变圆、皱缩，胞核增大。加入不同浓度的GLP-1后，与AGEs组相比，加入5、10、20nmol/LGLP-1组细胞大小较为均一，细胞呈圆形，形态趋向正常，损伤的细胞减少。图1不同处理组细胞形态学观察(×100)Fig.1Cellularmorphologyobservationofdifferentgroups(×100)1948天然产物研究与开发Vol.29

g/LAGEs30．71±2．28##200mg/LAGEs+5nmol/LGLP-125．61±2．54*200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-118．32±1，28*200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-116．26±3．12*注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vs200mg/LAGEsgroup．3．4GLP-1抑制AGEs诱导的成纤维细胞凋亡如图2中Hoechst33258核染色检测结果显示，与正常组比较，200mg/LAGEs处理成纤维细胞24h后，细胞凋亡率明显增多;与200mg/LAGEs组损伤相比。200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1组对细胞凋亡的作用，差异具有统计学意义(P＜0．05)。图2GLP-1对AGEs诱导成纤维细胞凋亡的影响Fig.2EffectofGLP-1onAGEs-inducedapoptosisoffibroblastcells(Mean±SD，n=4)注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vs200nmol/LAGEsgroup3．5GLP-1减少AGEs诱导的成纤维细胞凋亡如图3中流式细胞仪检测结果显示，正常组凋亡率为6．73%，200mg/LAGEs处理细胞凋亡率明显增加，而200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1组、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1组处理24h可明显地减少凋亡细胞的数量;与AGEs组比较，差异具有统计学意义(P＜0．05)。3．6Westernblot检测各组凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2的水平细胞发生凋亡时，促凋亡蛋白Caspase-3产生增加，而抑制凋亡蛋白Bcl-2减少。WesternBlot检测结果如图4所示:与对照组相比，200mg/LAGEs组的Caspase-3上调及Bcl-2下调明显。说明AGEs促进成纤维细胞凋亡。而加入GLP-1后，与AGEs组相比，200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1的Caspase-3表达量均下调，而抑制凋亡Bcl-2分别上调，且差异具有统计学意义(P＜0．05)。4讨论与结论糖尿病心肌病中活性氧(ＲOS)增强，，最主要的原因是高血糖引起的糖自身氧化，而在AGEs形成
【作者单位】： 九江学院附属医院心内科;九江学院转化医学实验室;
【基金】：国家自然科学基金(地区)基金(81660152) 江西省教育厅科技课题(GJJ09350)
【分类号】：R587.2

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本文编号：2551828