linc00619在人肺上皮细胞中的生物学功能及其调节机理研究

发布时间：2020-03-27 21:26

【摘要】：目的:初步探讨linc00619在人肺上皮细胞中的作用及其调节机理,从而为过敏性哮喘的治疗提供潜在的靶点。方法:运用生物信息学方法对公共数据集GSE8190(尘螨(HDM)诱导的人气道上皮细胞表达谱数据集)进行数据挖掘;利用CY3标记的探针采用RNA-FISH方法对linc00619在人肺上皮细胞(BEAS-2B)进行亚细胞定位;采用CRISPR/Cas9方法构建linc00619的dgRNA慢病毒载体并测序确认,利用linc00619的dgRNA慢病毒载体瞬时转染BEAS-2B细胞,嘌呤霉素筛选获得稳转株后,分析linc00619敲除对BEAS-2B细胞的细胞增殖和迁移能力的影响;Western blot分析AKT、MEK以及ERK等增殖相关信号分子;lncRNA芯片检测linc00619敲除后差异表达的lncRNAs和mRNAs,对差异表达的mRNAs进行GO和KEGG富集分析;同时预测linc00619的顺式(cis)和反式(trans)调控的靶基因并进行GO和KEGG富集分析。结果:linc00619在HDM诱导的上皮细胞中显著高表达(4倍);linc00619定位于细胞质;linc00619的dgRNA慢病毒载体瞬时转染BEAS-2B细胞,嘌呤霉素筛选获得稳转株后,PCR检测及测序结果表明,成功获得了linc00619的dgRNA突变株。细胞增殖试验及Transwell检测结果表明,linc00619敲除促进了细胞的增殖和迁移能力;WB检测结果表明,linc00619敲除抑制了p-AKT/AKT、p-MEK/MEK的表达并促进了p-ERK/ERK的表达。对芯片检测的linc00619敲除后显著差异表达的mRNAs进行GO和KEGG富集分析结果表明,linc00619通过多个生物进程和多个信号通路参与了BEAS-2B的生物学功能。该现象在linc00619顺式和反式调控的靶基因中也存在。结论:1.linc00619位于细胞质;2.linc00619抑制了肺上皮细胞的增殖和迁移;3.linc00619通过多个生物进程和多个信号通路参与了过敏性哮喘的发生发展;
【图文】：

为了分析linc00619在各组织中的表达情况，我们用UCSC网站进行了分析，结果表明：linc00619在各个组织中都有所表达，且其在转化的成纤维细胞中的表达明显升高（图1），由此我们推测linc00619可能参与了过敏性哮喘发生发展进程中发挥了重要的作用。图 1：linc00619 在各组织的表达Figure 1: Expression of linc00619 in various organizations为了分析linc00619的潜在功能，我们预测了它的靶基因，并通过DAVID

（https://www.david.ncifcrf.gov/tools.jsp）在线数据库对靶基因进行了KEGG信号通路富集分析。结果表明，抗原加工与提呈信号通路（Antigen processing and presentation，，图2）显著被富集，说明linc00619可能通过该信号调控了人肺上皮细胞的功能，从而影响了过敏性哮喘的发病机制。图 2：抗原加工与提呈信号通路Figure 2: Antigen processing and presentation signaling pathways
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R562.25

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本文编号：2603410