慢性氟中毒大鼠肝组织中PI3K-Akt1相关蛋白及其mRNA的表达及意义

发布时间：2020-05-07 09:59

【摘要】：目的:研究PI3K信号通路在氟中毒大鼠肝脏组织中表达以及LY294002抑制PI3K信号通路的影响,探讨PI3K信号通路对氟中毒大鼠肝脏损伤的作用机制及意义。方法:SD大鼠48只,按体重随机分4组,每组12只,对照组:常规饲料(实验动物中心提供玉米含氟量为1.6mg/kg,饲料中含氟量为1.5mg/kg);氟中毒组:饲以取自病区的玉米用前加配料并加工制成条状喂养(加工后的含氟量为10mg/kg);阻断剂组:氟中毒大鼠饲料同前,处死动物前1周尾静脉注射阻断剂LY294002,持续三周;阻断对照组:氟中毒大鼠饲料同前,处死动物前1周尾静脉注射阻断剂稀释液PBS。观察大鼠氟斑牙的发生情况,氟离子电极法检测尿氟、骨氟含量;自动血生化分析仪检测大鼠肝功能;光镜观察肝组织病理形态学改变;免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)、Western blot和实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)分别检测肝组织中PI3K、Akt1蛋白及其m RNA的表达;流式细胞术测定肝组织细胞凋亡及胞内钙离子浓度。结果:1、氟中毒组、阻断对照组氟斑牙的发生率增加,且骨氟、尿氟的含量较对照组明显增高((P0.05)),而阻断剂组大鼠骨氟、尿氟含量较对照组的差异不明显,表明慢性氟中毒动物模型建立成功。2、与正常对照组相比,氟中毒组和阻断对照组中ALT和AST活性升高,而TP和ALB活性降低;而与阻断组相比较,氟中毒组和阻断剂对照组ALT和AST活性降低,而TP和ALB活性升高。表明氟中毒大鼠肝脏功能有损伤。病理形态学观察发现氟中毒大鼠肝脏损伤不明显。3、与对照组相比,氟中毒组、阻断剂对照组肝组织中PI3K、Akt1蛋白及其m RNA的表达升高,阻断组与氟中毒组、阻断剂对照组比较,其表达均降低,差异有统计学意义(P0.05)。4、氟中毒大鼠肝细胞凋亡细胞个数比对照组及阻断剂组增多;阻断剂组凋亡细胞较正常对照组略微增多;氟中毒组与阻断对照组无明显差异。氟中毒组肝细胞总凋亡率增加,阻断剂组凋亡细胞较氟中毒组减少。除对照组和阻断剂组、氟中毒组与阻断剂对照组之间比较无明显差异外,其余各组之间比较差异均有统计学意义(P0.05)。5、氟中毒组及阻断对照组细胞内钙离子荧光强度有明显增强;除对照组和阻断剂组、氟中毒组与阻断剂对照组之间比较无显著差异外,其余组之间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论氟可以激活大鼠肝组织PI3K-Akt信号通路,LY294002则抑制PI3K-Akt信号通路的激活,表明PI3K-Akt信号通路可能参与氟中毒是引起肝脏损伤发病机制的环节之一。
【图文】：

组织病理,氟中毒,阻断剂,对照组

贵阳医学院 2015 届科学学位硕士研究生学位论文18浆淡染；少数肝细胞脂肪变性；肝汇管区可见结缔组织轻度增生。（图1）1A 1B1C 1D图1 大鼠肝脏组织病理形态学变化对照组(1A)，氟中毒组(1B)，，阻断剂组(1C)，阻断对照组(1D) HE 中倍放大Figure 1. Pathological changes in liver tissue in the experimental ratsControl group(1A), fluorosis group(1B), blocking group(1C), blocking control group(1D).There appeared edema in the liver cell of rats with fluorosis(1B); small vacuolardegeneration in some cytoplasm of the liver cell and mild hyperplasia of connective tissue inhepatic periportal(1B and 1D)2.5 大鼠肝组织PI3K、AKT蛋白表达水平2.5.1 免疫组织化学方法检测大鼠肝组织PI3K、AKT1的蛋白表达，阳性表达区域主要出现在肝小叶的小叶中心区及汇管区，细胞核或者细胞浆呈棕黄色颗粒。对照组PI3K、AKT1蛋白表达较少；氟中毒组和阻断对照组阳性表达的细胞数明显增多，颜色较深；与氟中毒组和阻断剂对照组比较，阻断剂组肝细胞的阳性细

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2G 2HPI3K Akt图2 大鼠肝组织中PI3K、Akt1蛋白的表达情况（注：对照组:2A 和 2B；氟中毒组：2C 和 2D；阻断组：2E 和 2F；阻断对照组：2G 和 2H）中倍放大Fig.2 The protein of PI3K and Akt in the liver of different groups. Control group(2A and 2B),fluorosis group(2C and 2D), blocking group(2E and 2F), blocking control group(2G and 2H).
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R595

【参考文献】