甲状腺激素对胰岛β细胞自身胰岛素抵抗的作用及机制研究

发布时间：2020-06-02 08:40

【摘要】：目的1、通过检测胰岛素信号通路蛋白在小鼠胰岛β细胞中的表达,从细胞水平探讨游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)对小鼠胰岛β细胞(MIN6)细胞株自身的胰岛素抵抗的作用。2、探讨内质网应激在高FT3引起MIN6细胞自身胰岛素抵抗中的作用。方法1、体外传代培养小鼠胰岛β(MIN6)细胞株,取15-25代细胞种于六孔板中,待其培养至融合度80%时,分实验组(高FT3)与对照组(正常FT3)、内质网应激抑制剂组(高FT3+4-PBA)、胰岛素抵抗抑制剂组(高FT3+钒酸钠),实验组以20pg/ml的FT3,对照组以5pg/ml FT3,抑制剂组为20pg/ml FT3+1mmol/L4-PBA和20pg/ml FT3+5umol/L钒酸钠,分别干预MIN6细胞48小时后,运用蛋白质印迹(western blot)法检测IRS-1 ~(Ser307)(Ser307磷酸化位点)、Akt等胰岛素信号通路蛋白与PERK、IRE1、ATF6、GRP78等内质网应激相关蛋白,以及CHOP、caspase12等内质网特异性凋亡蛋白的表达水平,比较对照组与实验组、抑制剂组蛋白的表达差异;2、应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测各组上清液中胰岛素浓度,比较各组上清液中胰岛素浓度是否存在差异。结果1、高FT3组IRS-1Ser307的表达量明显高于正常FT3组,Akt表达量则明显低于正常FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。上清液胰岛素测定中,高FT3组上清液胰岛素浓度明显低于正常FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。加胰岛素抵抗抑制剂钒酸钠后,高FT3+钒酸钠组IRS-1Ser307的表达量明显低于高FT3组,Akt的表达量则明显高于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。上清液胰岛素测定中,高FT3+钒酸钠组上清液胰岛素浓度明显高于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。2、高FT3组PERK、IRE1、ATF6、GRP78等内质网应激相关蛋白表达量均明显高于正常FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。加内质网应激抑制剂4-PBA后,高FT3+4-PBA组PERK、IRE1、ATF6、GRP78等内质网应激相关蛋白表达量均明显低于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。加内质网应激抑制剂4-PBA后,高FT3+4-PBA组IRS-1Ser307的表达量明显低于高FT3组,Akt表达量则明显高于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。加内质网应激抑制剂后,高FT3+4-PBA组上清液胰岛素浓度明显高于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。3、高FT3组CHOP、caspase12等凋亡相关蛋白表达量均明显高于正常FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。加内质网应激抑制剂后,高FT3+4-PBA组CHOP、caspase12等凋亡相关蛋白表达量均明显低于高FT3组,配对t检验得P0.05,差异具有统计学意义。结论1、高FT3可导致MIN6细胞的胰岛素信号通路蛋白IRS-1Ser307表达上调,Akt表达下调,并抑制MIN6细胞的胰岛素分泌,即高FT3可能引起胰岛β细胞的自身胰岛素抵抗。2、高FT3可导致MIN6细胞PERK、IRE1、ATF6、GRP78等内质网相关蛋白表达上调,加用内质网应激抑制剂后,PERK、IRE1、ATF6、GRP78等内质网相关蛋白表达下调,胰岛素信号通路蛋白IRS-1Ser307表达下调、Akt表达上调,细胞胰岛素分泌量上调,即高FT3可能引起内质网应激,并通过内质网应激途径引起胰岛细胞自身的胰岛素抵抗。3、高FT3可导致MIN6细胞CHOP、caspase12等凋亡相关蛋白表达上调,通过上调内质网应激特异性凋亡蛋白CHOP、Caspase12表达促进MIN6细胞凋亡,参与胰岛β细胞的自身胰岛素抵抗。
【图文】：

福建医科大学硕士论文验，P＜0.05 有统计学意义。结果 各分组目的蛋白相对表达量的比较各分组干预 48 小时后，提取细胞总蛋白，用 Western-blot 检测各分、Akt 等胰岛素信号通路蛋白的表达水平，用 Quantity One 图像分析软条带的灰度值。以 IRS-1Ser307、Akt 蛋白条带的吸光度与β-actin 条带的值作为目的蛋白的相对表达量，，以比较各组间蛋白表达的差异。1 正常 FT3 组与高 FT3 组胰岛信号通路蛋白表达量的比较

3）高 FT3 组 IRS-1Ser307的表达量明显高于正常 FT3 组，Akt 的表达量则明显低于组，通过配对 t 检验得到*P<0.05，n=3。2 高 FT3 组与高 FT3+钒酸钠（胰岛素抵抗抑制剂）组胰岛素信号通路蛋比较
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1;R581.1

【参考文献】

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本文编号：2692899