黄芪多糖对2型糖尿病模型大鼠AMPK、UCP2表达的影响

发布时间：2017-03-28 10:17

  本文关键词：黄芪多糖对2型糖尿病模型大鼠AMPK、UCP2表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：2型糖尿病(T2DM)作为作为最常见的内分泌代谢疾病，在近些年，发病率逐年上升，胰岛素抵抗(IR)是T2DM的发病基础。而信号转导异常是IR的一个重要机制，有研究显示，黄芪多糖(APS)，可以改善胰岛索抵抗，提高胰岛索敏感性，调节糖、脂代谢，但是其深层的机制尚末完全研究清楚。 目的：观察APS对2型糖尿病大鼠肝脏腺苷酸活化蛋自激酶(AMP-activated protein kinase; AMPKa)及胰腺解拙连蛋白2(uncoupling proteins2; UCP2)在去些因和蛋白水平表达达的影响，探讨APS改善胰岛索抵抗(IR)的可能作用和机制，为今后APS应用于临床提供理沦依据。 方法：(1)随机选用健康雄性SD (Spargue-Dawley)大鼠60只，体币210-230g，适应性喂养1周后随机分子为空白对照组(NC组，n=10)和高脂模型组(HFM组，n=50)，分别给于标准饲料和高脂饲料喂养。同时每周记录大鼠体重(BW),喂养6周末HFM组的平均体重较NC组平均体垂大于20%,认为肥胖大鼠造模成功。 (2)HFM组继而应用链服佐菌素(Steptozotocin, STZ,25mg/kg)腹胜注射建立2型糖尿病大鼠模型。72h后尾静脉采血测量随机血糖，，随机血糖16.7mmol/L的人鼠纳入糖尿病模型组，并在STZ注射2周末复查随机血糖，把血糖16.7mmol/L大鼠剔除出组。将造模成功大鼠(n=45)随机分为4组，分别为糖尿病对照组(DMC组，生理盐水灌胃，n=12)、吡格列酮组(Pio组，20mg/kg·d(?)此格列酮灌胃，n=11)、黄芪多糖组(APS组，400mg/kg·d APS灌胃，n=11)和黄芪多糖+吡格列酮组(APP组，400mg/kg·d APS和20mg/kg-d毗格列酮灌胃，n=11)，同时NC组给予同体积生理盐水灌胃，各组饮食不变。 (3)药物干预4周后，将各组大鼠予10%水合氯醛腹腔麻醉，心内取血用于检测血浆空腹血糖(FBG)，血清胆固醇(TC)、甘油三酷(TG),空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI)。分离附睾脂肪垫、肾周及网膜脂肪并称重，计算内脏脂肪含量(VF/W)。采用半定量逆转录PCR法(RT-PCR)检测肝脏AMPKα及胰腺UCP2mRNA的相对表达量,采用免疫印迹法(Western-Blotting, WB)测肝脏AMPKα、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phospho-AMP-activated protein kinase; p-AMPKa)及UCP2蛋白表达水平。 结果：(1).高脂侧养6周可诱导SD大鼠明显肥胖,HFM组体重显著增加,与NC组比较,差异有显著性(P0.01)；两组大鼠之间随机血糖比较,差异无显著性(P0.05)。STZ造模后,模型大鼠随机血糖水平显著升高,差异有显著性(P0.01)。 (2).在12周末,和NC组比较,DMC组、Pio组、APS组、APP组的FBG、 TG、TC、FINS及VF/W水平升高,ISI水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。和DMC组比较,Pio绀、APS组、APP组FBG、TG、 TC、FINS水、平及VF/W降低,ISI水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。胰岛素抵抗模型成功,与APP组比较,APS组、Pio组上述指标差异无统计学意义(P0.05) (3). RT-PCR检测：和NC组比较,其它各组的AMPKα的mRNA表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。同DMC组.比较,APS组、Pio组、APP组的AMPKa的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)。同APP组比较,Pio组、APS组的AMPKa的mRNA表达量降低,差异无统计学意义(P0.05)。Pio组、APS组的AMPKa的mRNA差异无统计学意义。 和NC组比较,余下4组的UCP2的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)。同DMC组比较,APS组、Pio组、APP组UCP2的mRNA表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。同APP组比较,Pio绀、APS组UCP2的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)。Pio组及APS组UCP2差异物统计学意义(P0.05)。 (4). Western-Blotting检测：和NC组比较,DMC组、APS组、Pio组、APP组的AMPKa、p-AMPKa蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)；和DMC组比较,Pio组、APS组、APP组的AMPKa、p-AMPKa表达量升高,差异有显著意义(P0.05)；与APP组比较,APS组、Pio组的AMPKa、p-AMPKa蛋白表达量降低,但无统计学意义(P0.05)；而Pio绀、APS组的AMPKa、p-AMPKa蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。 和NC组比较,DMC组、APS组、Pio组、APP组的UCP2蛋白表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)；和DMC组比较,Pio组、APS组、APP组的UCP2蛋白表达量降低0.05),差异有统计学意义(P0.05)；与APP组比较,APS组、Pio组的UCP2蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。而Pio组及APS组的UCP2蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。 结论：(1).APS可改善糖尿病大鼠的IR。 (2).APS改善IR的作用可能与上调AMPKα、p-AMPKa及下调UCP2水平有关。
【关键词】：黄芪多糖 胰岛素抵抗 腺苷酸活化蛋白激酶 解耦连蛋白2
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 1 材料和方法15-28
• 1.1 主要实验仪器15-18
• 1.1.1 实验仪器15
• 1.1.2 药物和试剂15-16
• 1.1.3 RT-PCR主要试剂的配制16
• 1.1.4 蛋白质免疫印迹法（Western-blotting)试剂的配制16-18
• 1.2 动物实验18-20
• 1.2.1 实验动物18
• 1.2.2 动物分组18-19
• 1.2.3 饲料配制19-20
• 1.2.4 药物灌胃20
• 1.3 实验方法20-28
• 1.4 统计学处理28
• 2 结果28-39
• 2.1 一般情况观察28
• 2.2 糖尿病造模阶段28-30
• 2.3 药物干预阶段30-33
• 2.4 干预后各组间大鼠肝脏AMPKa及胰腺UCP2 mRNA表达量的变化33-34
• 2.5 干预后各组间人鼠肝脏AMPKoup-AMPKoi及胰腺UCP2蛋白的变化34-38
• 2.6 相关性分析38-39
• 3 讨论39-46
• 3.1 2型糖尿病动物模型的选择与建立39
• 3.2 噻唑烷二酮类(TZDs)药物对2型糖尿病的的影响39-40
• 3.3 黄芪多糖(APS)改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用40-41
• 3.4 APS对AMPK的影响41-43
• 3.5 APS对UCP2的影响43-46
• 3.6 APS对AMPK和UCP2的影响46
• 4 结论46-47
• 参考文献47-54
• 综述54-64
• 参考文献60-64
• 主要缩略语64-65
• 攻读学位期间发表文章及获奖情况65-66
• 致谢66-67
• 个人简历67

【参考文献】

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本文编号：272091