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巨噬细胞ATP6V0d2在肥胖病程发展中的作用

发布时间:2020-06-20 11:44
【摘要】:目的:巨噬细胞内摄并降解甘油三酯的功能在肥胖脂肪组织中受损会加重脂肪累积和脂肪细胞胰岛素抵抗症状。ATP6V0d2作为V-ATPase的亚基之一,特异性高表达与巨噬细胞并可能影响溶酶体酸化及膜融合,与巨噬细胞降解功能密切相关。本论文探究巨噬细胞ATP6V0d2蛋白在脂肪代谢、肥胖发生发展,及胰岛素抵抗病理进程中的作用。方法:1)构建野生型与Atp6v0d2-/-小鼠高脂饮食诱导的肥胖模型,观测体重、体脂比、血脂、血糖水平变化;2)分离纯化肥胖模型小鼠的骨髓来源巨噬细胞,流式细胞术检测野生型与Atp6v0d2-/-小鼠巨噬细胞M1/M2极化差异;3)提取小鼠骨髓来源巨噬细胞、胚胎成纤维干细胞及成熟脂肪细胞蛋白,Western blot检测ATP6V0d2蛋白在脂肪组织主要细胞组分中的表达水平;4)分离纯化野生型与Atp6v0d2-/-小鼠骨髓来源巨噬细胞,模拟肥胖脂肪组织环境给予饱和脂肪酸刺激,油红O染色细胞爬片,观察细胞内甘油三酯蓄积量差异;5)提取脂肪酸刺激后的野生型与Atp6v0d2-/-骨髓来源巨噬细胞的RNA,RT-PCR检测脂肪合成与降解主要相关基因的m RNA水平;6)提取脂肪酸刺激前后的野生型小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA,RT-PCR检测Atp6v0d1和Atp6v0d2的m RNA水平变化;7)提取肥胖和正常野生型小鼠的骨髓来源巨噬细胞蛋白,Western blot检测ATP6V0d2蛋白水平变化。结果:1)Atp6v0d2-/-肥胖小鼠体重增长率和基础血糖水平高于野生型,且骨髓巨噬细胞M1型极化趋势较强,M2型极化比例显著低于野生型小鼠。2)脂肪组织中,巨噬细胞特异性高表达ATP6V0d2蛋白;脂肪酸刺激后Atp6v0d2-/-巨噬细胞的脂滴数量多于野生型,但脂肪代谢相关酶转录水平无统计学差异。3)脂肪酸刺激会下调巨噬细胞Atp6v0d2的m RNA水平,长期给予高脂饲料则可抑制野生型小鼠ATP6V0d2蛋白表达。结论:脂肪组织中,ATP6V0d2主要表达于巨噬细胞,参与巨噬细胞对甘油三酯的降解过程,但并非通过调节脂代谢相关酶转录起作用。ATP6V0d2蛋白缺失的小鼠巨噬细胞向M2型极化受抑制,体重增长加快,基础血糖水平更高。此外,脂肪酸对于ATP6V0d2的转录和表达具有负向调节的作用。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R589.2
【图文】:

小鼠,高脂饲料,野生型,体重增长


华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文结果一、 ATP6V0d2 蛋白在小鼠肥胖发展中的作用1. Atp6v0d2-/-小鼠体重增长速度更快为了研究 ATP6V0d2 在肥胖过程中的作用,我们用 TALEN 技术构建了Atp6v0d2 基因敲除小鼠,选取雄性 5-7 周体重接近的野生型和 Atp6v0d2-/-小鼠构建高脂饮食肥胖模型。实验发现在四组小鼠每周平均摄入热量一致的前提下,高脂喂养自第 5 周起,Atp6v0d2-/-高脂组小鼠每周体重增长率逐渐高于野生型(P= 0.039),食用普通饲料的对照组则无差别;至第 11 周时,Atp6v0d2-/-高脂组小鼠体重增长率远高于其他三组(图 1)。这组数据显示在摄入高脂饲料时,Atp6v0d2-/-小鼠的肥胖进程较野生型小鼠发展更快。

小鼠,体重,野生型,模型小鼠


图 2.高脂喂养的 Atp6v0d2-/-小鼠体脂比与野生型接近模型小鼠喂养至第 12 周称量体重(A),测量小鼠腰围(B)与体长(C)后,断颈处死小鼠,解剖剥离肝脏、各主要白色脂肪部分称重,计算其与体重之比(D)。图 3. Atp6v0d2-/-小鼠血脂水平与野生型接近

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本文编号:2722368

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